A photoconvertible fluorescent reporter to track chaperone-mediated autophagy.
A photoconvertible fluorescent reporter to track chaperone-mediated autophagy.
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DOI：
10.1038/ncomms1393
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发表时间：
2011-07-12
影响因子：
16.6
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
分子伴侣介导的自噬（CMA）是溶酶体中可溶性蛋白降解的一种选择性机制。CMA有助于细胞质量控制，并作为细胞对不同应激源反应的一部分被激活。在衰老和不同的年龄相关疾病中已发现有缺陷的CMA。到目前为止，CMA活性只能在分离溶酶体后在体外测量。在这里，我们报告的光转换荧光报告，允许在活细胞中的CMA活性监测的发展。CMA的活化增加了报告分子与溶酶体的缔合，其被可视化为细胞内荧光的变化。CMA报告基因可用于多种细胞，适用于高含量显微镜检查。使用这个报告，我们发现，基础和诱导型CMA活性的水平是细胞类型依赖性的，我们已经确定了这一途径的上调反应的蛋白酶体的催化抑制。
Chaperone-mediated autophagy (CMA) is a selective mechanism for the degradation of soluble proteins in lysosomes. CMA contributes to cellular quality control and is activated as part of the cellular response to different stressors. Defective CMA has been identified in aging and different age-related diseases. Until now, CMA activity could only be measured in vitro upon isolation of lysosomes. Here we report the development of a photoconvertible fluorescent reporter that allows monitoring of CMA activity in living cells. Activation of CMA increases the association of the reporter with lysosomes which are visualized as a change in the intracellular fluorescence. The CMA reporter can be utilized in a broad variety of cells and is suitable for high-content microscopy. Using this reporter, we find that levels of basal and inducible CMA activity are cell-type dependent and we have identified an upregulation of this pathway in response to the catalytic inhibition of the proteasome.
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作者：
Bandyopadhyay, Urmi;Kaushik, Susmita;Cuervo, Ana Maria
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Cuervo, Ana Maria
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通讯作者：
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作者：
Cuervo, Ana Maria
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Cuervo, Ana Maria
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作者：
Kaushik, Susmita;Massey, Ashish C.;Cuervo, Ana Maria
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Cuervo, Ana Maria