CRISPR/Cas9
CRISPR/Cas9
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DOI：
10.21769/bioprotoc.3295
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发表时间：
2019-07-05
期刊：
影响因子：
0.8
通讯作者：
Yamaguchi, Tomoyuki
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Mizuno, Naoaki;Mizutani, Eiji;Yamaguchi, Tomoyuki
CRISPR/Cas9进行的胚胎内基因组编辑使基因敲除动物的快速产生成为可能。然而，将大片段直接插入胚胎基因组仍然是困难的，特别是在没有供体DNA显微注射的情况下。病毒载体是转基因供体DNA在细胞系中的良好载体，但似乎不适合于早期胚胎周围有透明带、糖蛋白膜的植入前胚胎。我们发现腺相关病毒(AAV)可以通过完整的透明带感染多种哺乳动物的受精卵。AAV介导的供体DNA在Cas9核糖核蛋白电穿孔后的传递使大片段的敲入无需显微操作。
Intra-embryo genome editing by CRISPR/Cas9 has enabled rapid generation of gene knockout animals. However, large fragment knock-in directly into embryos' genome is still difficult, especially without microinjection of donor DNA. Viral vectors are good transporters of knock-in donor DNA for cell lines, but seemed unsuitable for pre-implantation embryos with zona pellucida, glycoprotein membrane surrounding early embryos. We found adeno-associated virus (AAV) can infect zygotes of various mammals through intact zona pellucida. AAV-mediated donor DNA delivery following Cas9 ribonucleoprotein electroporation enables large fragment knock-in without micromanipulation.