Functional analysis of the adenovirus type 5 DNA-binding protein: site-directed mutants which are defective for adeno-associated virus helper activity.
Functional analysis of the adenovirus type 5 DNA-binding protein: site-directed mutants which are defective for adeno-associated virus helper activity.
复制标题
腺病毒 5 型 DNA 结合蛋白的功能分析：腺相关病毒辅助活性有缺陷的定点突变体。
DOI：
10.1128/jvi.60.2.653-661.1986
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发表时间：
1986
影响因子：
5.4
通讯作者：
Kitchingman,GR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Quinn,CO;Kitchingman,GR
我们产生了四个点突变的DNA结合蛋白（DBP）基因的腺病毒5型的阿托西肽定点突变。突变的位点位于先前通过比较序列分析（G. R. Kitchingman，Virology 146：90-101，1985）。突变导致氨基酸181（Trp至Leu）、323（Arg至Leu）、324（Trp至Leu）和469（Phe至Ile）发生变化。将突变的DBP基因置于猿猴病毒40早期启动子的控制下，并通过转染分析其帮助腺相关病毒在COS-1猴细胞中复制其DNA的能力。芳香族氨基酸324和469中的突变使AAV DNA复制量减少约10倍，而Arg 323中的突变产生约4倍的减少。氨基酸181中的Trp-至-Leu突变对AAV DNA复制没有影响。323、324和469突变的辅助活性降低不是由突变对DBP稳定性的任何影响引起的。这些结果表明，CR2和CR 3参与AAV辅助活性，特别是在AAV DNA复制。这些发现的相关性，以确定残基的DBP在腺病毒感染的功能的重要性进行了讨论。
We generated four point mutations in the DNA-binding protein (DBP) gene of adenovirus type 5 by oligonucleotide-directed site-specific mutagenesis. The sites mutated were in the three conserved regions (CR; amino acids 178-186 [CR1], 322-330 [CR2], and 464-475 [CR3]) identified previously by comparative sequence analysis (G. R. Kitchingman, Virology 146:90-101, 1985). The mutations resulted in changes in amino acids 181 (Trp to Leu), 323 (Arg to Leu), 324 (Trp to Leu), and 469 (Phe to Ile). The mutated DBP genes were put under the control of the simian virus 40 early promoter and analyzed by transfection for their ability to help adeno-associated virus replicate its DNA in COS-1 monkey cells. Mutations in the aromatic amino acids 324 and 469 reduced the amount of AAV DNA replication approximately 10-fold, while the mutation in Arg 323 produced a reduction of approximately fourfold. The Trp-to-Leu mutation in amino acid 181 had no effect on AAV DNA replication. The decreased helper activity of the 323, 324, and 469 mutations was not caused by any effect of the mutation on the stability of the DBP. These results suggest that CR2 and CR3 are involved in AAV helper activity, specifically in AAV DNA replication. The relevance of these findings to the identification of residues important for the functions of DBP in adenovirus infection is discussed.
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Beavis,AD