Peripherin Is Tyrosine‐Phosphorylated at Its Carboxyl‐Terminal Tyrosine
Peripherin Is Tyrosine‐Phosphorylated at Its Carboxyl‐Terminal Tyrosine
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外周蛋白的羧基末端酪氨酸被酪氨酸磷酸化
作者：
J. Angelastro;Chung;T. Frappier;R. Liem;L. Greene
翻译后摘要：外周蛋白是一种III型中间丝存在于外周和某些中枢神经系统神经元。我们在这里报告，外周蛋白含有磷酸酪氨酸残基，因此，是唯一确定的中间丝蛋白已知以这种方式进行修改。磷酸酪氨酸特异性抗血清识别存在于PC 12细胞（有或没有神经生长因子处理）和大鼠坐骨神经中的外周蛋白，以及在Sf-9细胞和SW-13 cl中表达的外周蛋白。2个Vim−细胞。通过免疫沉淀、二维等电聚焦/十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶和磷酸氨基酸分析证实了外周蛋白作为PC 12细胞中酪氨酸磷酸化蛋白的身份。与丝氨酸/苏氨酸磷酸化不同，外周蛋白的酪氨酸磷酸化不受去极化或神经生长因子治疗的调节。为了鉴定酪氨酸磷酸化的位点，在几个酪氨酸残基处突变大鼠外周蛋白并在SW-13 cl中表达。2个Vim−细胞。酪氨酸磷酸化仅在羧基末端酪氨酸（Y 474）突变的外周蛋白突变体中选择性丧失。间接免疫荧光染色表明，野生型外周蛋白和外周蛋白Y 474 F在SW-13 cl中形成丝状网络。2个Vim−细胞。这表明外周蛋白C末端残基的酪氨酸磷酸化不是组装所必需的，并且留下了这种修饰具有其他功能的可能性。
Abstract: Peripherin is a type III intermediate filament present in peripheral and certain CNS neurons. We report here that peripherin contains a phosphotyrosine residue and, as such, is the only identified intermediate filament protein known to be modified in this manner. Antiserum specific for phosphotyrosine recognizes peripherin present in PC12 cells (with or without nerve growth factor treatment) and in rat sciatic nerve as well as that expressed in Sf‐9 cells and SW‐13 cl. 2 vim− cells. The identity of peripherin as a tyrosine‐phosphorylated protein in PC12 cells was confirmed by immunoprecipitation, two‐dimensional isoelectric focusing/sodium dodecyl sulfate‐polyacrylamide gel electrophoresis gels, and phosphoamino acid analysis. Unlike serine/threonine phosphorylation, tyrosine phosphorylation of peripherin is not regulated by depolarization or nerve growth factor treatment. To identify the site of tyrosine phosphorylation, rat peripherin was mutated at several tyrosine residues and expressed in SW‐13 cl. 2 vim− cells. Tyrosine phosphorylation was selectively lost only for peripherin mutants in which the carboxy‐terminal tyrosine (Y474) was mutated. Indirect immunofluorescence staining indicated that both wild‐type peripherin and peripherin Y474F form a filamentous network in SW‐13 cl. 2 vim− cells. This indicates that tyrosine phosphorylation of the peripherin C‐terminal residue is not required for assembly and leaves open the possibility that this modification serves other functions.
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Liem,RK