Engineered allosteric activation of kinases in living cells.
Engineered allosteric activation of kinases in living cells.
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DOI：
10.1038/nbt.1639
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发表时间：
2010-07
影响因子：
46.9
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
细胞和组织动力学的研究大大受益于可以在生命系统中特异性和精确定时控制蛋白质活性的工具。我们在这里描述了一种新的方法来赋予别构调节激酶的催化活性。激酶催化结构域的高度保守部分被小的蛋白质插入物修饰，其使催化活性失活，但不影响其他蛋白质相互作用。通过添加雷帕霉素或非免疫抑制类似物恢复催化活性（图1A）。我们通过在活细胞中几分钟内特异性激活粘着斑激酶（FAK）来证明这种方法，从而证明FAK在调节膜动力学中的新作用。分子建模和诱变表明，蛋白质插入通过增加催化结构域的灵活性来降低活性。药物结合通过增加刚性来恢复活性。Src和p38的成功调控表明，对这一高度保守位点的修饰将适用于其他激酶。
Studies of cellular and tissue dynamics benefit greatly from tools that can control protein activity with specificity and precise timing in living systems. We describe here a new approach to confer allosteric regulation specifically on the catalytic activity of kinases. A highly conserved portion of the kinase catalytic domain is modified with a small protein insert that inactivates catalytic activity, but does not affect other protein interactions. Catalytic activity is restored by addition of rapamycin or non-immunosuppresive analogs (Fig. 1A). We demonstrate the approach by specifically activating focal adhesion kinase (FAK) within minutes in living cells, thereby demonstrating a novel role for FAK in regulation of membrane dynamics. Molecular modeling and mutagenesis indicate that the protein insert reduces activity by increasing the flexibility of the catalytic domain. Drug binding restores activity by increasing rigidity. Successful regulation of Src and p38 suggest that modification of this highly conserved site will be applicable to other kinases.
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影响因子：
6
作者：
Sood, AK;Coffin, JE;Hendrix, MJC
通讯作者：
Hendrix, MJC
影响因子：
5.3
作者：
SCHALLER, MD;HILDEBRAND, JD;PARSONS, JT
通讯作者：
PARSONS, JT
DOI：
10.4161/cc.8.7.8044
发表时间：
2009-04-01
期刊：
Cell cycle (Georgetown, Tex.)
影响因子：
--
作者：
Foster DA;Toschi A
通讯作者：
Toschi A
影响因子：
4.8
作者：
Gerwins, P;Blank, JL;Johnson, GL
通讯作者：
Johnson, GL
影响因子：
46.9
作者：
Tucker, CL;Fields, S
通讯作者：
Fields, S