Structure, subunit topology, and actin-binding activity of the Arp2/3 complex from Acanthamoeba.
Structure, subunit topology, and actin-binding activity of the Arp2/3 complex from Acanthamoeba.
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DOI：
10.1083/jcb.136.2.331
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发表时间：
1997-01-27
影响因子：
7.8
通讯作者：
Pollard, TD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mullins, RD;Stafford, WF;Pollard, TD
Arp 2/3复合物，首先从卡氏阿米巴中分离出的profilin亲和层析，由七个多肽;两个actinrelated蛋白，Arp 2和Arp 3;和五个显然是新的蛋白质，p40，p35，p19，p18和p14。该复合物是均匀的流体动力学标准与斯托克斯半径为5.3 nm的凝胶过滤，沉降系数为8.7 S，和分子量为197 kD的分析超离心。亚基的化学计量比为1：1：1：1：1：1：1，表明纯化的复合物含有七种多肽中的每一种的一个拷贝。在电子显微镜下，复合物具有双叶或马蹄形，外部尺寸为13 × 10 nm，这种形状和尺寸的数学模型与测量的流体动力学性质一致。用一组具有不同间隔臂长度和化学反应性的交联剂进行化学交联，可以识别复合物中的以下最近邻：Arp 2和p40; Arp 2和p35; Arp 3和p35; Arp 3和p18或p19;以及p19和p14。通过荧光抗体染色与抗p40和p35，复合物集中在皮层的阿米巴，特别是在线性结构，可能肌动蛋白丝束，位于垂直于前缘。纯化的Arp 2/3复合物与肌动蛋白丝结合的Kd为2.3 μM，每个肌动蛋白单体约有一个复合物分子。在负染样品的电子显微照片中，Arp 2/3复合物装饰肌动蛋白丝的侧面。EDC/NHS将肌动蛋白与Arp 3、p35和低分子量亚基p19、p18或p14交联。我们提出了Arp 2/3复合物的结构和拓扑模型，并建议肌动蛋白丝的亲和力占复杂的亚基的本地化放线菌丰富的地区阿米巴。
The Arp2/3 complex, first isolated from Acanthamoeba castellani by affinity chromatography on profilin, consists of seven polypeptides; two actinrelated proteins, Arp2 and Arp3; and five apparently novel proteins, p40, p35, p19, p18, and p14. The complex is homogeneous by hydrodynamic criteria with a Stokes' radius of 5.3 nm by gel filtration, sedimentation coefficient of 8.7 S, and molecular mass of 197 kD by analytical ultracentrifugation. The stoichiometry of the subunits is 1:1:1:1:1:1:1, indicating the purified complex contains one copy each of seven polypeptides. In electron micrographs, the complex has a bilobed or horseshoe shape with outer dimensions of ∼13 × 10 nm, and mathematical models of such a shape and size are consistent with the measured hydrodynamic properties. Chemical cross-linking with a battery of cross-linkers of different spacer arm lengths and chemical reactivities identify the following nearest neighbors within the complex: Arp2 and p40; Arp2 and p35; Arp3 and p35; Arp3 and either p18 or p19; and p19 and p14. By fluorescent antibody staining with anti-p40 and -p35, the complex is concentrated in the cortex of the ameba, especially in linear structures, possibly actin filament bundles, that lie perpendicular to the leading edge. Purified Arp2/3 complex binds actin filaments with a K d of 2.3 μM and a stoichiometry of approximately one complex molecule per actin monomer. In electron micrographs of negatively stained samples, Arp2/3 complex decorates the sides of actin filaments. EDC/NHS cross-links actin to Arp3, p35, and a low molecular weight subunit, p19, p18, or p14. We propose structural and topological models for the Arp2/3 complex and suggest that affinity for actin filaments accounts for the localization of complex subunits to actinrich regions of Acanthamoeba.
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DOI：
10.1083/jcb.99.3.769
发表时间：
1984-09
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Pollard TD
通讯作者：
Pollard TD
两个基于微管的囊泡运输的激活剂。
影响因子：
7.8
作者：
Schroer, T A;Sheetz, M P
通讯作者：
Sheetz, M P
DOI：
10.1083/jcb.131.2.385
发表时间：
1995-10
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Kelleher JF;Atkinson SJ;Pollard TD
通讯作者：
Pollard TD
影响因子：
7.8
作者：
AEBI, U;FOWLER, WE;SMITH, PR
通讯作者：
SMITH, PR
影响因子：
--
作者：
Kuntz, I D Jr;Kauzmann, W
通讯作者：
Kauzmann, W