Luciferase reporter gene assay on human 5-HT receptor: which response element should be chosen?
Luciferase reporter gene assay on human 5-HT receptor: which response element should be chosen?
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人 5-HT 受体荧光素酶报告基因检测：应选择哪种响应元件？
DOI：
10.1038/srep08060
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发表时间：
2015-01-27
影响因子：
4.6
通讯作者：
Huang J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen Y;Xu Z;Wu D;Li J;Song C;Lu W;Huang J
5-羟色胺(5-羟色胺)受体是抗精神病药物开发的重要分子靶点。目前报道的检测5-羟色胺受体的方法，如cAMP蓄积法和钙内流测定法，往往需要专门的仪器，而且不方便。基于荧光素酶负责元件调控表达的荧光素酶报告基因检测因其高度的敏感性和可靠性而被广泛应用于多种靶点的高通量功能检测。然而，5-羟色胺受体与多个G蛋白偶联，调节各自的下游信号通路，通常使用不同的反应元件来检测。因此，寻找合适的反应元件来实现对不同5-羟色胺受体的检测，并使荧光素酶报告基因检测的结果具有通用性，对于活性化合物的筛选是非常有用的。在这里，我们使用5-羟色胺结合的CRE、NFAT和SRE反应元件进行了三种荧光素酶报告元件的检测，以检测CHO-K1细胞中不同的5-羟色胺受体的激活情况。对已报道的配体(激动剂和拮抗剂)的效力和有效性进行了测定和比较。我们的结果表明，Cre-荧光素酶报告基因是检测G蛋白偶联的5-羟色胺受体活性的敏感和可靠的方法。
Serotonin (5-HT) receptors are valuable molecular targets for antipsychotic drug discovery. Current reported methods for detecting 5-HT receptors, such as cAMP accumulation and calcium influx assay, are often demanding specialized instruments and inconvenient. The luciferase reporter gene assay, based on the responsible-element-regulated expression of luciferase, has been widely applied in the high-throughput functional assay for many targets because of its high sensitivity and reliability. However, 5-HT receptors couple to multiple G-proteins regulate respective downstream signalling pathways and are usually detected using different response elements. Hence, finding a suitable response element to fulfil the detection of different 5-HT receptors and make the results of luciferase reporter gene assays generalizable is very useful for active compounds screening. Here, we conducted three luciferase reporter assays using CRE, NFAT and SRE response elements attached to 5-HT to detect the activation of different 5-HT receptors in CHO-K1 cells. The potencies and efficacies of the reported ligands (agonists and antagonists) were determined and compared. Our results indicate that CRE-luciferase reporter gene is sensitive and reliable to detect the activities of G protein-coupled 5-HT receptors.
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影响因子：
3.6
作者：
RAYMOND, JR;ALBERS, FJ;MIDDLETON, JP
通讯作者：
MIDDLETON, JP
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SCHOEFFTER, P;HOYER, D
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HOYER, D
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作者：
Wurch, T;Colpaert, FC;Pauwels, PJ
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Pauwels, PJ
影响因子：
3.6
作者：
Rauly-Lestienne, Isabelle;Boutet-Robinet, Elisa;Cussac, Didier
通讯作者：
Cussac, Didier
DOI：
10.2174/1875397301004010084
发表时间：
2010-12-21
期刊：
Current chemical genomics
影响因子：
--
作者：
Cheng Z;Garvin D;Paguio A;Stecha P;Wood K;Fan F
通讯作者：
Fan F