影响大肠埃希菌 FtsZ 功能和自身组装的重要氨基酸分析
影响大肠埃希菌 FtsZ 功能和自身组装的重要氨基酸分析
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DOI：
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
卢锋
中科院分区：
文献类型：
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作者：
郑晓伟;卢乔楠;霍雨佳;马远方;卢锋
目的 探索大肠埃希菌（Escherichia coli）FtsZ突变体FtsZP74R、FtsZG77D和FtsZA81R 对FtsZ功能和胞内自身组装的影响及机制。方法 利用分子克隆和定点突变技术，常规构建带His及YFP标签的FtsZ及其突变体融合表达载体，亲和纯化得到相应的蛋白；采用同源重组技术构建FL37(△ftsZ-Cat)菌株; 活细胞成像观察FtsZ及其突变体在胞内定位模式；免疫共沉淀实验检测FtsZ与其突变体间的相互作用；光扫描检测定点突变对FtsZ组装特性的影响；高压液相色谱法检测FtsZ突变体GTPase酶活性的变化。结果 FtsZ P74R、FtsZ G77D和FtsZ A81R突变体在E.coli内不能正确的定位和形成功能性Z环、FtsZ-FtsZ*单体间的相互作用减弱或消失、突变体体外聚合能力减弱及FtsZ A81R的GTPase酶活性显著降低。结论 P74、G77和A81是影响FtsZ功能和胞内正确组装的重要氨基酸；A81R 可同时影响FtsZ的侧面相互作用和GTPase活性。