Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus.
Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus.
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DOI：
10.3791/62677
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发表时间：
2021-05-13
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Saha D
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nguyen HM;Sah N;Humphrey MRM;Rabkin SD;Saha D
溶瘤病毒（OV），如溶瘤单纯疱疹病毒（oHSV），是癌症免疫治疗领域中快速发展的治疗策略。OV（包括oHSV）选择性地在癌细胞中复制并杀死癌细胞（保留健康/正常细胞），同时诱导抗肿瘤免疫。由于这些独特的性质，基于oHSV的治疗策略越来越多地用于临床前和临床上的癌症治疗，包括FDA批准的talimogene laherparevec（T-Vec）。生长、纯化和滴定是任何OV（包括oHSV）在用于实验研究之前的三种基本实验室技术。本文描述了一种简单的分步方法，以扩增oHSV在Vero细胞。随着oHSV的繁殖，它们在Vero细胞中产生细胞病变效应（CPE）。一旦90 - 100%的感染细胞显示出CPE，将它们轻轻收获，用核酸酶和氯化镁（MgCl 2）处理，过滤，并使用蔗糖梯度法进行纯化。纯化后，在Vero细胞中通过"噬斑测定"确定感染性oHSV（指定为噬斑形成单位或PFU）的数量。本文所述的方案可用于制备用于细胞培养中的体外研究和体内动物实验的高滴度oHSV原液。
Oncolytic viruses (OVs), such as the oncolytic herpes simplex virus (oHSV), are a rapidly growing treatment strategy in the field of cancer immunotherapy. OVs, including oHSV, selectively replicate in and kill cancer cells (sparing healthy/normal cells) while inducing anti-tumor immunity. Because of these unique properties, oHSV-based treatment strategies are being increasingly used for the treatment of cancer, preclinically and clinically, including FDA-approved talimogene laherparevec (T-Vec). Growth, purification, and titration are three essential laboratory techniques for any OVs, including oHSVs, before they can be utilized for experimental studies. This paper describes a simple step-by-step method to amplify oHSV in Vero cells. As oHSVs multiply, they produce a cytopathic effect (CPE) in Vero cells. Once 90–100% of the infected cells show a CPE, they are gently harvested, treated with benzonase and magnesium chloride (MgCl2), filtered, and subjected to purification using the sucrose-gradient method. Following purification, the number of infectious oHSV (designated as plaque-forming units or PFUs) is determined by a “plaque assay” in Vero cells. The protocol described herein can be used to prepare high-titer oHSV stock for in vitro studies in cell culture and in vivo animal experiments.
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影响因子：
3.1
作者：
SVENNERHOLM, B;VAHLNE, A;LYCKE, E
通讯作者：
LYCKE, E
影响因子：
3.7
作者：
Mundle ST;Hernandez H;Hamberger J;Catalan J;Zhou C;Stegalkina S;Tiffany A;Kleanthous H;Delagrave S;Anderson SF
通讯作者：
Anderson SF
影响因子：
5.2
作者：
Froechlich G;Caiazza C;Gentile C;D'Alise AM;De Lucia M;Langone F;Leoni G;Cotugno G;Scisciola V;Nicosia A;Scarselli E;Mallardo M;Sasso E;Zambrano N
通讯作者：
Zambrano N
DOI：
10.3791/52065
发表时间：
2014-11-04
期刊：
Journal of visualized experiments : JoVE
影响因子：
--
作者：
Baer A;Kehn-Hall K
通讯作者：
Kehn-Hall K
DOI：
10.1038/mto.2015.10
发表时间：
2015
期刊：
Molecular therapy oncolytics
影响因子：
--
作者：
Peters C;Rabkin SD
通讯作者：
Rabkin SD