Proof-of-concept analytical instrument for label-free optical deconvolution of protein species in a mixture.
Proof-of-concept analytical instrument for label-free optical deconvolution of protein species in a mixture.
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用于混合物中蛋白质种类的无标记光学解卷积的概念验证分析仪器。
DOI：
10.1016/j.chroma.2021.461968
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Hales JE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hales JE
摘要生物制药行业采用过程分析技术可以降低治疗药物的成本，促进新生物工艺的研究。控制关键工艺参数以在严格范围内保持关键产品质量属性对于确保始终如一的高产品质量非常重要，但开发所需的复杂分析技术已被证明是一个主要挑战。在这里，我们展示了一种新的光学技术，用于连续监测从色谱柱洗脱的蛋白质物种，即使它们与其他蛋白质物种完全共洗脱，也不需要对洗脱剖面进行任何假设或峰拟合。为了实现这一目标，我们设计并构建了一个时间分辨的本态荧光寿命色谱仪，并建立了一个分析框架，用于实时反卷积和定量不同但共洗脱的蛋白质种类。这种概念验证技术具有潜在的有用应用，可作为过程分析技术，更广泛地作为混合物中蛋白质无标签定量的分析技术。
AbstractThe adoption of process analytical technologies by the biopharmaceutical industry can reduce the cost of therapeutic drugs and facilitate investigation of new bioprocesses. Control of critical process parameters to retain critical product quality attributes within strict bounds is important for ensuring a consistently high product quality, but developing the sophisticated analytical technologies required has proven to be a major challenge. Here, we demonstrate a new optical technique for continuous monitoring of protein species as they are eluted from a chromatographic column, even when they fully co-elute with other protein species, without making any assumption about or peak-fitting to the elution profile. To achieve this, we designed and constructed a time-resolved intrinsic fluorescence lifetime chromatograph, and established an analytical framework for deconvolving and quantifying distinct but co-eluting protein species in real time. This proof-of-concept technology has potentially useful applications as a process analytical technology and more generally as an analytical technique for label-free quantification of proteins in mixtures.
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通讯作者：
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1990
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作者：
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通讯作者：
Barkley,MD