Transient inhibition of p53 enhances prime editing and cytosine base-editing efficiencies in human pluripotent stem cells.
Transient inhibition of p53 enhances prime editing and cytosine base-editing efficiencies in human pluripotent stem cells.
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DOI：
10.1038/s41467-022-34045-7
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发表时间：
2022-10-27
影响因子：
16.6
通讯作者：
Zhou, Ting
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Li, Mu;Zhong, Aaron;Wu, Youjun;Sidharta, Mega;Beaury, Michael;Zhao, Xiaolan;Studer, Lorenz;Zhou, Ting
人类多能干细胞（hPSCs）的精确基因编辑为研究和潜在治疗人类疾病提供了巨大的希望。起始编辑和碱基编辑都避免了引入双链断裂，但较低的编辑效率使得这些技术在人乳头状细胞中仍然是一个艰巨的过程。在这里，我们报道了p53DD （p53的显性负片段）的共同递送可以大大提高在hPSCs中产生精确突变的引物编辑和胞嘧啶碱基编辑效率。我们进一步将PE3与p53DD联合应用于高效地创建多个等基因hPSC系，包括携带与帕金森病相关的GBA或LRRK2突变的系，以及与Hutchinson-Gilford早衰综合征相关的LMNA突变的系。我们还纠正了患者特异性iPSCs中的GBA和LMNA突变。我们的数据表明，p53DD在不影响全基因组安全性的情况下提高了PE3的效率，使其能够安全和常规地生成用于疾病建模的等基因hPSC系。Li等人报道，在不影响全基因组安全性的情况下，共同传递p53的显性负片段（p53DD）大大提高了人类多能干细胞中引物编辑和胞嘧啶碱基编辑的精确编辑效率。
Precise gene editing in human pluripotent stem cells (hPSCs) holds great promise for studying and potentially treating human diseases. Both prime editing and base editing avoid introducing double strand breaks, but low editing efficiencies make those techniques still an arduous process in hPSCs. Here we report that co-delivering of p53DD, a dominant negative fragment of p53, can greatly enhance prime editing and cytosine base editing efficiencies in generating precise mutations in hPSCs. We further apply PE3 in combination with p53DD to efficiently create multiple isogenic hPSC lines, including lines carrying GBA or LRRK2 mutations associated with Parkinson disease and a LMNA mutation linked to Hutchinson-Gilford progeria syndrome. We also correct GBA and LMNA mutations in the patient-specific iPSCs. Our data show that p53DD improves PE3 efficiency without compromising the genome-wide safety, making it feasible for safe and routine generation of isogenic hPSC lines for disease modeling. Li et al. report that co-delivering a dominant negative fragment of p53 (p53DD) greatly enhances precise editing efficiencies for prime editing and cytosine base editing in human pluripotent stem cells, without compromising the genome-wide safety.
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