Interactions of peptides with DnaK and C-terminal DnaK fragments studied using fluorescent and radioactive peptides.
Interactions of peptides with DnaK and C-terminal DnaK fragments studied using fluorescent and radioactive peptides.
复制标题
使用荧光和放射性肽研究肽与 DnaK 和 C 末端 DnaK 片段的相互作用。
DOI：
10.1006/abbi.1998.0784
复制
发表时间：
1998
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Walker,GC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhang,J;Walker,GC
用 N-((2-(乙酰氧基)乙基)-N-甲基)氨基-7-硝基苯甲-2-氧杂-1,3-二唑 (ANBD) 修饰肽 C (KLIGVLSSLFRPK) 的单半胱氨酸衍生物，以引入荧光探针。然后使用五种肽 C 衍生物（PepC-V5C-ANBD、PepC-L6C-ANBD、PepC-S7C-ANBD、PepC-S8C-ANBD 和 PepC-L9C-ANBD）研究 DnaK 的肽结合特性。在肽 C 的第 8 和第 9 位引入 ANBD 部分，产生的肽以与未修饰的肽 C 类似的高亲和力与 DnaK 结合。相比之下，在第 6 位携带 ANBD 的衍生物 PepC-L6C-ANBD 与 DnaK 的结合亲和力比 PepC-L9C-ANBD 低 470 倍。在位置 5 或 7 处携带 ANBD 的肽 C 衍生物具有中等 DnaK 结合亲和力。通过测定 PepC-L9C-ANBD 和 PepNR-S6C-[1-14C]乙酰胺与 DnaK 和 DnaK 的三个 C 末端片段、DnaK 384–638（残基 384 至 638）、DnaK 389–607（残基 389 至 607）和 DnaK 的结合亲和力386-561（残基386至561），我们发现DnaK的最后31个残基（残基607-638）对肽与DnaK的结合没有显着影响。然而，残基 561 至 607 形成与 DnaK [X. Zhu, X. Zhou, W. F. Burkholder, A. Gragerov, C. M. Ogata, M. E. Gottesman, and W. A. Hendrickson,Science272, 1606–1614, 1996]，在稳定 DnaK/肽复合物方面发挥着重要作用。 PepC-L9C-ANBD 与 DnaK、DnaK 384-638、DnaK 389-607 和 DnaK 386-561 结合的动力学也支持这一观察结果。
Monocysteine derivatives of Peptide C (KLIGVLSSLFRPK) were modified withN-((2-(acetoxy)ethyl)-N-methyl)amino-7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazole (ANBD) to introduce a fluorescent probe. Five Peptide C derivatives—PepC-V5C-ANBD, PepC-L6C-ANBD, PepC-S7C-ANBD, PepC-S8C-ANBD, and PepC-L9C-ANBD—were then used to investigate the peptide-binding properties of DnaK. Introduction of the ANBD moiety at positions 8 and 9 of Peptide C yields peptides that bind to DnaK with a high affinity similar to unmodified peptide C. In contrast, the derivative carrying ANBD at position 6, PepC-L6C-ANBD, bound to DnaK with a binding affinity 470 times lower than that of PepC-L9C-ANBD. Peptide C derivatives carrying ANBD at positions 5 or 7 have intermediate DnaK binding affinities. By assaying the binding affinities of PepC-L9C-ANBD and PepNR-S6C-[1-14C]acetamide to DnaK and three C-terminal fragments of DnaK, DnaK 384–638 (residues 384 to 638), DnaK 389–607 (residues 389 to 607) and DnaK 386–561 (residues 386 to 561), we found that the last 31 residues of DnaK (residues 607–638) do not have a significant effect on the peptide binding to DnaK. However, residues 561 to 607, which form the C, D, and E α-helices directly adjacent to the peptide binding pocket of DnaK [X. Zhu, X. Zhou, W. F. Burkholder, A. Gragerov, C. M. Ogata, M. E. Gottesman, and W. A. Hendrickson,Science272, 1606–1614, 1996], play important roles in stabilizing the DnaK/peptide complex. The kinetics of PepC-L9C-ANBD binding to DnaK, DnaK 384–638, DnaK 389–607, and DnaK 386–561 also support this observation.