河弧菌 paar 基因功能研究
河弧菌 paar 基因功能研究
复制标题
DOI：
--
复制
发表时间：
2020-04
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
梁未丽
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
刘笑舒;张安冉;黄元铭;刘平;韩雨;阚飙;梁未丽
目的 研究河弧菌85003VI型分泌系统VflT6SS2核心基因簇上游paar基因（AL536_RS29530）编码蛋白的结构特征、功能及其对河弧菌VflT6SS2功能的影响。方法 利用自杀质粒介导的同源重组技术构建paar基因缺失株，PCR扩增并克隆paar基因于pSRKTc表达载体获得回补质粒，导入相应缺失株得到回补株。Western Blot（WB）检测缺失株和回补株中T6SS效应蛋白Hcp的表达和分泌，细菌杀菌实验检测菌株杀菌毒力变化。荧光定量反转录聚合酶链式反应检测tssB2和hcp mRNA表达水平。启动子-Lux 报告系统的冷光表型检测确定VflT6SS2核心基因簇启动子及hcp启动子在野生株和缺失株背景下的活性差异。结果 成功构建河弧菌85003的paar基因的精确缺失株和相应的回补株；WB检测缺失株中Hcp的表达和分泌较野生株明显降低，同时其对大肠埃希菌的菌间杀伤能力也降低，导入相应回补质粒可使缺失株Hcp的表达、分泌和杀菌表型恢复到野生株水平；hcp和tssB2的mRNA水平检测显示缺失株低于野生株，差异有显著性，但VflT6SS2核心基因簇的启动子活性和hcp启动子活性在野生株及缺失株中无明显差异，提示paar基因可能在转录后水平调控VflT6SS2。结论 河弧菌中paar（AL536_RS29530）基因编码产物是河弧菌VflT6SS2的组成部分，为其功能所需，缺失该基因导致VflT6SS2的分泌和杀菌能力缺陷，但其具体的调控机制有待进一步研究。