小麦TILLING突变体检测中基因组DNA提取方法的优化
小麦TILLING突变体检测中基因组DNA提取方法的优化
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DOI：
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发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
宋建成
中科院分区：
文献类型：
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作者：
徐艳;徐继发;陈磊;赵吉强;Zeyu Fu;Paula Jameson;宋建成
为了优化小麦高通量ＴＩＬＬＩＮＧ突变体扫描所需基因组ＤＮＡ提取的方法，对利用ＳＤＳ法、改良ＳＤＳ法、ＣＴＡＢ法、改良ＣＴＡＢ法、ＡｘｙＰｒｅｐ ＤＮＡ提取试剂盒、Ｑｉａｇｅｎ ＤＮｅａｓｙ Ｐｌａｎｔ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ试剂盒以及再生Ｑｉａｇｅｎ硅胶柱方法提取的小麦基因组ＤＮＡ进行了系统比较。结果表明，尽管７种方法所提取ＤＮＡ的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好，但再生Ｑｉａｇｅｎ硅胶柱方法、ＣＴＡＢ法和改良ＳＤＳ法的ＤＮＡ浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因１（ＴａＣＫＸ１）的ＤＮＡ序列设计引物，以新鲜ＤＮＡ样品用于ＰＣＲ扩增大于１０００ｂｐ的片段时，后４种方法扩增效果优于前３种方法；ＤＮＡ在－２０℃下保存１００ｄ后重新进行ＰＣＲ扩增时，则只有Ｑｉａｇｅｎ试剂盒和再生Ｑｉａｇｅｎ硅胶柱２种方法提取的ＤＮＡ能扩增出大于１０００ｂｐ的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组ＤＮＡ，既保证了ＤＮＡ的高质量，又降低了使用试剂盒的成本，为小麦ＴＩＬＬＩＮＧ库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的ＤＮＡ提取方法。...