Regulation of Phospholipase D in HL60 Cells
Regulation of Phospholipase D in HL60 Cells
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HL60 细胞中磷脂酶 D 的调节
DOI：
--
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发表时间：
1995
影响因子：
4.8
通讯作者：
J. Exton
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
A. R. Siddiqi;Jennie L. Smith;A. Ross;R. Qiu;M. Symons;J. Exton
用鸟苷5′- O-（3-硫代三磷酸）（GTPS）刺激HL 60细胞，在细胞浆和细胞膜中检测到磷脂酶D（PLD）活性。在磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇4，5-二磷酸的存在下，当外源性标记的磷脂酰胆碱时，在膜中检测到GTP刺激的PLD活性，但当使用[3 H]肉豆蔻酸标记的内源性底物时，则没有检测到。胞质PLD共同色谱与小GTP结合蛋白的阴离子交换柱，但随后的色谱分离这些。重建研究表明，ADP核糖基化因子（ARF）作为调节胞质PLD，而Rho蛋白RhoA和CDC 42 Hs是无效的。胞浆酶表现出很小的活性，在GTPS的情况下，由2 M钙刺激，而膜酶有显着的基础活性，并被抑制钙。Rho特异性GDP解离抑制剂抑制GTPS刺激膜PLD活性的存在和不存在的胞质溶胶。GDP解离通道处理的膜中的刺激可以通过添加重组Rho蛋白（RhoA，Rac 1，CDC 42 Hs）而部分恢复。RhoA和Rac 1在未处理的膜中也具有刺激性。然而，蛋白质印迹分析的膜显示的RhoA的存在下，而不是Rac 1或CDC 42 Hs，这表明RhoA是内源性的小GTP结合蛋白参与GTP依赖性PLD活性在细胞质的情况下，在膜。ARF也刺激膜PLD在GTPS的存在下，和RhoA和ARF的组合表现出协同效应。这些结果表明，存在的ARF依赖PLD活性在细胞质和膜。膜含有另一种PLD活性，其内源性调节剂似乎是RhoA。这些数据表明，在HL 60细胞中至少存在两种不同的PLD同工酶。
Phospholipase D (PLD) activity that was stimulated by guanosine 5′- O-(3-thiotriphosphate) (GTPS) was detected in cytosol and membranes of HL60 cells. GTPS-stimulated PLD activity was detected in the membranes when exogenous labeled phosphatidylcholine was used in the presence of phosphatidylethanolamine and phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate, but not when [3H]myristic acid-labeled endogenous substrate was used. Cytosolic PLD co-chromatographed with small GTP-binding proteins on anion-exchange columns, but subsequent chromatography separated these. Reconstitution studies demonstrated ADP ribosylation factor (ARF) as a regulator of cytosolic PLD, whereas the Rho proteins RhoA and CDC42Hs were ineffective. The cytosolic enzyme showed very little activity in the absence of GTPS and was stimulated by 2 m M Ca, whereas the membrane enzyme had significant basal activity and was inhibited by Ca. Rho-specific GDP dissociation inhibitor inhibited GTPS stimulation of membrane PLD activity in the presence and absence of cytosol. The stimulation in GDP dissociation inhibitor-treated membranes could be partially recovered by the addition of recombinant Rho proteins (RhoA, Rac1, CDC42Hs). RhoA and Rac1 were also stimulatory in untreated membranes. However, Western blot analysis of membranes showed the presence of RhoA, but not Rac1 or CDC42Hs, suggesting that RhoA was the endogenous small GTP-binding protein involved in GTP-dependent PLD activity in membranes in the absence of cytosol. ARF also stimulated the membrane PLD in the presence of GTPS, and the combination of RhoA and ARF showed a synergistic effect. These results show the presence of ARF-dependent PLD activity in both cytosol and membranes. The membranes contain another PLD activity for which the endogenous regulator appears to be RhoA. The data suggest the existence of at least two different PLD isozymes in HL60 cells.
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--
作者：
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通讯作者：
Dubyak,GR
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DOI：
--
发表时间：
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通讯作者：
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1990-12
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
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通讯作者：
Hong Zhang;N. N. Desai-N.;J. M. Murphey;Sarah Spiegel
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DOI：
--
发表时间：
1992
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Siddiqui,RA;Exton,JH
通讯作者：
Exton,JH
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DOI：
--
发表时间：
1989
期刊：
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--
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通讯作者：
Michaelis,K