消皮素D通过介导细胞焦亡导致重症急性胰腺炎肠道损伤的机制研究
消皮素D通过介导细胞焦亡导致重症急性胰腺炎肠道损伤的机制研究
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DOI：
10.3760/cma.j.cn121430-20200814-00578
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
田飞
中科院分区：
文献类型：
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作者：
林天娇;潘新亭;万有栋;吴自谦;吕韶燕;王芸芸;宋婧宇;田飞
目的探讨消皮素D(GSDMD)在重症急性胰腺炎(SAP)小鼠肠道损伤中的作用机制。方法将C57BL/6小鼠按随机数字表法分为生理盐水(NS)组、小干扰RNA(siRNA)-NS组、SAP模型组和siRNA-SAP组,每组6只。通过腹腔注射雨蛙素50 μg/kg联合脂多糖(LPS)10 mg/kg构建SAP小鼠模型;NS组给予等量NS; siRNA-SAP组和siRNA-NS组在制模或注射NS前分3次经尾静脉注射siRNA 50 mg/kg。制模12 h后取各组小鼠眼球血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL-1β、IL-18)水平。处死小鼠观察腹腔内大体改变;取胰腺和回肠组织,光镜下观察胰腺及肠黏膜病理学改变;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肠道组织长链非编码RNA uc.173(lnc uc.173)表达;采用免疫组化法检测肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白带状闭锁蛋白-1(ZO-1)及闭合蛋白(Occludin)的表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肠道组织GSDMD蛋白表达。结果ELISA显示,SAP模型组血清IL-1β、IL-18水平较NS组和siRNA-NS组明显升高〔IL-1β(ng/L):146.66±1.40比44.48±5.76、81.49±10.75,IL-18(ng/L):950.47±177.09比115.43±16.40、 84.84±21.90,均P<0.05〕;siRNA-SAP组IL-1β、IL-18水平较SAP模型组明显降低〔IL-1β(ng/L):116.26±15.54比146.66±1.40,IL-18(ng/L):689.96±126.08比950.47±177.09,均P<0.05〕。大体观察显示,NS组和siRNA-NS组小鼠腹腔内未见明显异常;SAP模型组和siRNA-SAP组可见肠道有不同程度水肿、充血,但siRNA-SAP组损伤较SAP模型组明显减轻。光镜下显示,NS组和siRNA-NS组胰腺未见明显变化,肠黏膜未见明显损伤; SAP模型组和siRNA-SAP组胰腺组织有不同程度水肿、炎性细胞浸润、小叶结构破坏,回肠可见不同程度的肠黏膜破坏和绒毛断裂,但siRNA-SAP组病理损伤较SAP模型组明显减轻。RT-PCR显示,SAP模型组肠道组织lnc uc.173表达较NS组和siRNA-NS组显著降低(2-ΔΔCt:0.26±0.12比1.01±0.37、0.67±0.32,均P<0.05);而siRNA-SAP组lnc uc.173表达较SAP组明显升高(2-ΔΔCt:0.60±0.39比0.26±0.12,P<0.05)。免疫组化显示, NS组ZO-1、Occludin均沿肠黏膜上皮细胞分布,并呈强阳性表达;SAP模型组和siRNA-SAP组ZO-1、Occludin表达均明显减弱,但siRNA-SAP组较SAP模型组有所增强。Western blotting显示,SAP模型组肠道组织GSDMD蛋白表达水平较NS组和siRNA-NS组明显升高〔GSDMD蛋白(GSDMD-N/β-actin):1.99±0.46比1、1.00±0.78,均P<0.05〕;与SAP模型组相比,siRNA-SAP组GSDMD蛋白表达明显下降〔GSDMD蛋白(GSDMD-N/β-actin): 1.42±0.42比1.99±0.46,P<0.05〕。结论SAP小鼠全身炎症反应和肠黏膜屏障损伤可能与肠道组织GSDMD表达升高有关,GSDMD通过介导细胞焦亡促进炎性因子释放,导致肠道损伤,下调肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1及Occludin的表达,致使肠道黏膜损伤。