基于β-catenin/Lef1相互作用为靶标的新型抗肿瘤药物高通量筛选模型的建立
基于β-catenin/Lef1相互作用为靶标的新型抗肿瘤药物高通量筛选模型的建立
复制标题
DOI：
10.13345/j.cjb.180344
复制
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
刘晓平
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
陈云雨;牛夏忆;李妍;刘晓平
旨在以β-catenin/Lef1相互作用为靶标,建立基于ELISA原理的适用于靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂筛选的高通量筛选模型。利用DNA重组技术,将构建的β-catenin-pET-30a(+)重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli Rosetta (DE3),经诱导培养后进行β-catenin原核表达。采用亲和层析方法分离纯化β-catenin后,以GST Pulldown实验进行生物学活性鉴定。利用ELISA原理建立β-catenin/GST-Lef1结合的分子模型,通过优选GST-Lef1最佳包被浓度和β-catenin最佳反应浓度,建立适用于靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂筛选的高通量筛选模型。SDS-PAGE和Western blotting实验证实β-catenin的原核表达。GST Pulldown实验证实纯化的β-catenin具有良好的生物学活性。通过对基于ELISA原理建立的β-catenin/GST-Lef1结合的分子模型优化,选用10 μg/mL GST-Lef1和6 μg/mL β-catenin建立ELISA高通量筛选模型,其Z'因子为0.76。本研究成功建立了基于ELISA原理的β-catenin/GST-Lef1结合的分子模型,为靶向β-catenin/Lef1相互作用小分子抑制剂的高通量筛选奠定了基础。