Crystallization and preliminary X-ray analysis of the ergothioneine-biosynthetic methyltransferase EgtD.
Crystallization and preliminary X-ray analysis of the ergothioneine-biosynthetic methyltransferase EgtD.
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麦角硫因生物合成甲基转移酶 EgtD 的结晶和初步 X 射线分析
DOI：
10.1107/s2053230x1400805x
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发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Seebeck FP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Misson L;Blankenfeldt W;Seebeck FP
麦角硫因是组氨酸的氨基酸甜菜碱衍生物，发现于世纪以前。尽管有大量研究指出麦角硫因在氧化应激防御中的功能，但其确切的作用机制仍然难以捉摸。虽然人类和细菌病原体如结核分枝杆菌似乎都依赖于麦角硫因，但人类缺乏相应的生物合成酶。因此，它的生物合成可能成为潜在的药物靶点，在新的治疗结核病的发展。最近发现的麦角硫因生物合成基因在M。smeglobulin能够对其生物学进行更系统的研究。该途径由EgtD启动，EgtD是一种SAM依赖性甲基转移酶，可催化组氨酸的三甲基化反应，生成N（α），N（α），N（α）-三甲基组氨酸。本文报道了EgtD的重组生产、纯化和结晶。天然EgtD晶体在同步加速器光束线处衍射至2.35 μ m分辨率，而硒代甲硫氨酸标记的蛋白质晶体衍射至1.75 μ m分辨率，并在K边缘处产生显著的异常信号至2.77 μ m分辨率。 所有的晶体都属于空间群P212121，在不对称单元中具有两个EgtD单体。
Ergothioneine is an amino-acid betaine derivative of histidine that was discovered more than one century ago. Despite significant research pointing to a function in oxidative stress defence, the exact mechanisms of action of ergothioneine remain elusive. Although both humans and bacterial pathogens such as Mycobacterium tuberculosis seem to depend on ergothioneine, humans are devoid of the corresponding biosynthetic enzymes. Therefore, its biosynthesis may emerge as potential drug target in the development of novel therapeutics against tuberculosis. The recent identification of ergothioneine-biosynthetic genes in M. smegmatis enables a more systematic study of its biology. The pathway is initiated by EgtD, a SAM-dependent methyltransferase that catalyzes a trimethylation reaction of histidine to give N(α),N(α),N(α)-trimethylhistidine. Here, the recombinant production, purification and crystallization of EgtD are reported. Crystals of native EgtD diffracted to 2.35 Å resolution at a synchrotron beamline, whereas crystals of seleno-l-methionine-labelled protein diffracted to 1.75 Å resolution and produced a significant anomalous signal to 2.77 Å resolution at the K edge. All of the crystals belonged to space group P212121, with two EgtD monomers in the asymmetric unit.
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GENGHOF, DS
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Zwart, Peter H.