布鲁菌VirB5基因的克隆和原核表达及其蛋白纯化
布鲁菌VirB5基因的克隆和原核表达及其蛋白纯化
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DOI：
10.16437/j.cnki.1007-5038.2020.08.002
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
王爱华
中科院分区：
文献类型：
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作者：
房姣阳;李会玲;靳亚平;王爱华
布鲁菌Ⅳ型分泌系统是其重要的毒力因子之一,研究其组分中VirB5基因的作用对于阐明布鲁菌的致病机制具有重要意义。应用PCR技术从B.suis S2菌株中扩增VirB5基因,克隆到pMD19T-simple载体,经EcoRⅠ、XhoⅠ酶切,与表达载体pET32a连接,得到重组质粒pET32a-VirB5,测序鉴定正确后,转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中,通过IPTG诱导并确定最佳诱导条件,采用Ni柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果表明,克隆了717 bp大小的VirB5基因,构建了重组质粒pET32a-VirB5,诱导条件筛选表明,在37℃、菌液OD600值约为0.6时,用1.0 mmol/L IPTG诱导6 h,蛋白表达量最高,表达的蛋白分子质量约为45 ku,且主要以包涵体的形式存在,研究结果为布鲁菌致病机制的研究提供了材料