A novel approach to make homogeneous protease-stable monovalent streptavidin.
A novel approach to make homogeneous protease-stable monovalent streptavidin.
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一种制备均质蛋白酶稳定单价链霉亲和素的新方法。
DOI：
10.1016/j.bbrc.2015.06.058
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发表时间：
2015
影响因子：
3.1
通讯作者：
Yu,Hongjun
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhang,Min;Shao,Jinhui;Xiao,Juan;Deng,Wenbing;Yu,Hongjun
四聚体链霉亲和素和生物素之间的相互作用被认为是最强的非共价缔合之一。由于链霉亲和素-生物素系统的紧密结合和特异性结合，其已被广泛用于双分子标记、纯化、固定化，甚至用于治疗药物的靶向递送。在这里，我们报告了一种新的方法，使均匀的单价四聚体链霉亲和素。纯化的单价蛋白质具有热稳定性和蛋白酶稳定性。出乎意料的是，我们发现两种蛋白酶，蛋白酶K（PK）和枯草杆菌蛋白酶（SU），可以有效地从野生型亚基中去除His 8-标签，而不影响单价链霉亲和素的四聚体结构，从而使其更均一。此外，进行结晶以确保所制备的单价蛋白质的均一性。总的来说，单价链霉亲和素显示出增加的均一性，并且可能在广泛的研究领域中的许多未来应用中具有价值。
The interaction between the tetramer streptavidin and biotin is recognized as one of the strongest non-covalent associations. Owing to the tight and specific binding, the streptavidin-biotin system has been used widely for bimolecular labeling, purification, immobilization, and even for targeted delivery of therapeutics drugs. Here, we report a novel approach to make homogeneous monovalent tetramer streptavidin. The purified monovalent protein showed both thermal stability and protease stability. Unexpectedly, we found that two proteases, Proteinase K (PK) and Subtilisin (SU), can efficiently remove the His8-tag from the wild-type subunit without affecting the tetramer architecture of monovalent streptavidin, thus making it more homogeneous. In addition, crystallization was performed to assure the homogeneity of the monovalent protein prepared. Overall, monovalent streptavidin shows increased homogeneity and will likely be valuable for many future applications in a wide range of research areas.
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