Expression, purification, and characterization of a recombinant 5-lipoxygenase from potato tuber.
Expression, purification, and characterization of a recombinant 5-lipoxygenase from potato tuber.
复制标题
马铃薯块茎重组 5-脂氧合酶的表达、纯化和表征。
DOI：
10.1006/bbrc.1998.8115
复制
发表时间：
1998
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Reddy,CC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen,X;Reddanna,P;Reddy,GR;Kidd,R;Hildenbrandt,G;Reddy,CC
利用从马铃薯5-LOX保守序列设计的简并引物，从马铃薯cDNA文库中分离出全长5-LOX cDNA克隆。序列分析和比较表明，该氨基酸序列与其他植物LOXs具有较高的同源性。我们在大肠杆菌中表达了cDNA，并在Mono-Q柱上用阴离子交换液相色谱和高效液相色谱纯化了重组蛋白，使其电泳均匀。底物特异性分析表明，重组蛋白对亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸具有LOX活性，其中亚油酸为最佳底物。重组L1 5-LOX的相对LOX活性和产物谱与纯化马铃薯块茎5-LOX的测定值相当。重组L1 5-LOX与天然峰-2 5-LOX（最丰富的同工酶）在SDS-PAGE上进行比较，发现单条带质量明显相同，为97,000 Da，这与从氨基酸序列计算的L1分子质量吻合。
We have isolated a full length 5-LOX cDNA clone from potato cDNA library using degenerate primers designed from conserved sequences of LOXs. Sequence analysis and comparison of the deduced amino acid sequence revealed high homology to other plant LOXs. We have expressed the cDNA inEscherichia coliand purified the recombinant protein to electrophoretic homogeneity by anion exchange liquid chromatography followed by HPLC on a Mono-Q column. Substrate specificity of the purified recombinant protein revealed LOX activity towards linoleic, linolenic acid, arachidonic acids as substrates with linoleic acid being the best substrate. The relative LOX activity as well as the product profiles for the recombinant L1 5-LOX are comparable to values determined for the purified potato tuber 5-LOX. When the recombinant L1 5-LOX and the native peak-2 5-LOX (the most abundant isozyme) were compared on SDS-PAGE, single bands of apparently identical mass 97,000 Da, was observed, which agrees well with the L1 molecular mass calculated from amino acid sequences.
登录
查看更多内容
生物氧化系统
影响因子：
--
作者：
C. Reddy;G. A. Hamilton;K. Madyastha
通讯作者：
K. Madyastha
影响因子：
7.4
作者：
A. Geerts;D. Feltkamp;S. Rosahl
通讯作者：
S. Rosahl
影响因子：
2.9
作者：
GILL, SC;VONHIPPEL, PH
通讯作者：
VONHIPPEL, PH
编码马铃薯（Solanum tuberosum）块茎脂氧合酶的 cDNA 克隆的序列
影响因子：
7.4
作者：
R. Casey
通讯作者：
R. Casey
通过磁力分离对原肌球蛋白和其他细胞骨架蛋白进行特异性定量免疫沉淀。
DOI：
--
发表时间：
1993
期刊：
影响因子：
--
作者：
L'Ecuyer Tj;Fulton Ab
通讯作者：
Fulton Ab