Spatially isotropic four-dimensional imaging with dual-view plane illumination microscopy.
Spatially isotropic four-dimensional imaging with dual-view plane illumination microscopy.
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DOI：
10.1038/nbt.2713
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发表时间：
2013-11
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46.9
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文献类型：
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最佳的四维成像需要所有维度的高空间分辨率、高速度以及最小的光漂白和损伤。我们开发了一种双视图平面照明显微镜，通过以交替工作周期在两个垂直物镜之间切换照明和检测来提高时空分辨率。通过计算融合所得的体积视图可提供 330 nm 的各向同性分辨率。由于样品是静止的并且只需要两个视图，我们实现了 200 个图像/秒的成像速度（即 50 平面体积为 0.5 秒）。与在焦平面外照射样品的旋转盘共焦或贝塞尔光束方法不同，我们在数百个体积上保持高时空分辨率，并且光漂白可以忽略不计。为了说明我们的方法研究需要高速体积可视化和/或低光漂白的生物系统的能力，我们描述了活细胞中的微管追踪、线虫胚胎发生过程中14小时的核成像以及秀丽隐杆线虫大脑发育过程中5小时的神经连线成像。
Optimal four-dimensional imaging requires high spatial resolution in all dimensions, high speed and minimal photobleaching and damage. We developed a dual-view, plane illumination microscope with improved spatiotemporal resolution by switching illumination and detection between two perpendicular objectives in an alternating duty cycle. Computationally fusing the resulting volumetric views provides an isotropic resolution of 330 nm. As the sample is stationary and only two views are required, we achieve an imaging speed of 200 images/s (i.e., 0.5 s for a 50-plane volume). Unlike spinning-disk confocal or Bessel beam methods, which illuminate the sample outside the focal plane, we maintain high spatiotemporal resolution over hundreds of volumes with negligible photobleaching. To illustrate the ability of our method to study biological systems that require high-speed volumetric visualization and/or low photobleaching, we describe microtubule tracking in live cells, nuclear imaging over 14 h during nematode embryogenesis and imaging of neural wiring during Caenorhabditis elegans brain development over 5 h.
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影响因子：
46.9
作者：
Capoulade, Jeremie;Wachsmuth, Malte;Knop, Michael
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Knop, Michael
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