兔源抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抗体的制备及初步应用
兔源抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抗体的制备及初步应用
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DOI：
10.3969/j.issn.1000-4440.2019.06.018
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
王芳
中科院分区：
文献类型：
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作者：
陈萌萌;潘渊婷;范志宇;胡波;宋艳华;魏后军;仇汝龙;朱伟峰;徐为中;王芳
为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Western blot鉴定后免疫小鼠。结果显示,成功扩增Bcl-2编码序列并构建了pET- 32a-Bcl-2表达载体;SDS-PAGE结果显示,在16 ℃,5 h, 0.5 mmol /L IPTG的表达条件下,重组蛋白Bcl-2能够高效可溶性表达;Western blot结果表明纯化后的表达产物为高纯度的Bcl-2重组蛋白,将该蛋白质免疫小鼠后获得了特异性抗体,该抗体能够特异性识别重组Bcl-2蛋白,并应用该抗体鉴定RK13-B细胞中Bcl-2蛋白的过表达。