CREB trans-activation of disruptor of telomeric silencing-1 mediates forskolin inhibition of CTGF transcription in mesangial cells.
CREB trans-activation of disruptor of telomeric silencing-1 mediates forskolin inhibition of CTGF transcription in mesangial cells.
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CREB 端粒沉默破坏子 1 的反式激活介导毛喉素抑制系膜细胞中的 CTGF 转录。
DOI：
10.1152/ajprenal.00636.2009
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发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Kone,BruceC
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Yu,Zhiyuan;Kong,Qun;Kone,BruceC
结缔组织生长因子 (CTGF) 参与多种纤维化过程，包括肾小球硬化症。腺苷酸环化酶激动剂毛喉素通过尚不清楚的机制抑制系膜细胞中的 CTGF 表达。我们最近报道，端粒沉默 1 (Dot1) 的组蛋白 H3K79 甲基转移酶干扰物可抑制集合管细胞 (J Clin Invest117: 773–783, 2007) 和 HEK 293 细胞 (J Biol ChemIn press) 中的 CTGF 基因表达。在本研究中，我们表征了 Dot1 在介导毛喉素对小鼠系膜细胞中 CTGF 转录的抑制作用中的作用。 Dot1 的过度表达或毛喉素处理可显着抑制基础 CTGF mRNA 水平和 CTGF 启动子荧光素酶活性，同时使与 CTGF 启动子相关的染色质中的 H3K79 超甲基化。 Dot1 的 siRNA 敲低消除了 forskolin 对 CTGF mRNA 表达的抑制作用。对 Dot1 启动子序列的分析确定了位于 -384/-380 处的 CREB 响应元件 (CRE)。 CREB 的过表达增强了毛喉素刺激的 Dot1 启动子活性。组成型活性 CREB 突变体 (CREB-VP16) 强烈诱导 Dot1 启动子荧光素酶活性，而缺乏 CREB DNA 结合域的 CREBdLZ-VP16 的过表达消除了这种激活。 −384/−380 CRE 的突变导致 Dot1 启动子活性水平降低 70%。 ChIP 测定证实 CREB 与染色质中的 Dot1 启动子结合。我们得出的结论是，毛喉素刺激 CREB 介导的 Dot1 基因反式激活，从而导致 CTGF 启动子处的组蛋白 H3K79 过度甲基化，并抑制 CTGF 转录。这些数据首次描述了 Dot1 基因的调控，并揭示了 CTGF 转录的遗传和表观遗传控制的复杂网络。
Connective tissue growth factor (CTGF) participates in diverse fibrotic processes including glomerulosclerosis. The adenylyl cyclase agonist forskolin inhibits CTGF expression in mesangial cells by unclear mechanisms. We recently reported that the histone H3K79 methyltransferase disruptor of telomeric silencing-1 (Dot1) suppresses CTGF gene expression in collecting duct cells (J Clin Invest117: 773–783, 2007) and HEK 293 cells (J Biol ChemIn press). In the present study, we characterized the involvement of Dot1 in mediating the inhibitory effect of forskolin on CTGF transcription in mouse mesangial cells. Overexpression of Dot1 or treatment with forskolin dramatically suppressed basal CTGF mRNA levels and CTGF promoter-luciferase activity, while hypermethylating H3K79 in chromatin associated with the CTGF promoter. siRNA knockdown of Dot1 abrogated the inhibitory effect of forskolin on CTGF mRNA expression. Analysis of the Dot1 promoter sequence identified a CREB response element (CRE) at −384/−380. Overexpression of CREB enhanced forskolin-stimulated Dot1 promoter activity. A constitutively active CREB mutant (CREB-VP16) strongly induced Dot1 promoter-luciferase activity, whereas overexpression of CREBdLZ-VP16, which lacks the CREB DNA-binding domain, abolished this activation. Mutation of the −384/−380 CRE resulted in 70% lower levels of Dot1 promoter activity. ChIP assays confirmed CREB binding to the Dot1 promoter in chromatin. We conclude that forskolin stimulates CREB-mediatedtrans-activation of the Dot1 gene, which leads to hypermethylation of histone H3K79 at the CTGF promoter, and inhibition of CTGF transcription. These data are the first to describe regulation of the Dot1 gene, and disclose a complex network of genetic and epigenetic controls on CTGF transcription.