Characterization of glycoprotein B of the gammaherpesvirus equine herpesvirus-2
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DOI：
10.1099/0022-1317-79-7-1619
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发表时间：
1998-07-01
影响因子：
3.8
通讯作者：
Drummer, HE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Holloway, SA;Studdert, MJ;Drummer, HE
针对 γ 疱疹病毒马疱疹病毒 2 (EHV-2) 产生了 22 种单克隆抗体 (MAb)。使用蛋白质印迹分析，八种 MAb 识别大肠杆菌谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)-糖蛋白 B (gB) 融合蛋白，并使用重叠的 GST-SB 融合蛋白，将中和表位定位到氨基酸 29-74。其中一种 gB 特异性 MAb 用于表征 EHV-2 gB 的糖基化和合成动力学。 EHV-2 gB 被合成为 97 kDa 多肽，经共翻译修饰为 130 kDa 高甘露糖前体，在合成后不久形成 260 kDa 二聚体。每个 130 kDa 前体在进一步加工成 89 和 65/62 kDa 的含寡糖复合亚基之前，会被内切蛋白水解为 75 和 58 kDa 的二硫键连接的亚基。 EHV-2 gB 的 89 和 65/62 kDa 亚基分别含有 39 和 17 kDa 的 N-连接寡糖，并且不含有任何 O-连接寡糖。对纯化的 EHV-2 病毒粒子进行蛋白质印迹分析，确定 gB 在病毒粒子包膜中以 320 kDa 二聚体形式存在。
Twenty-two monoclonal antibodies (MAbs) were generated to the gammaherpesvirus equine herpesvirus-2 (EHV-2). Using Western blot analysis, eight MAbs recognized an Escherichia coli glutathione S-transferase (GST)-glycoprotein B (gB) fusion protein and, using overlapping GST-SB fusion proteins, a neutralization epitope was mapped to amino acids 29-74. One of the gB-specific MAbs was used to characterize the glycosylation and kinetics of synthesis of EHV-2 gB. EHV-2 gB is synthesized as a 97 kDa polypeptide that is co-translationally modified to a 130 kDa high-mannose precursor that forms a 260 kDa dimer shortly after synthesis. Each 130 kDa precursor is endoproteolytically cleaved to disulphide-linked subunits of 75 and 58 kDa prior to further processing to complex oligosaccharide-containing subunits of 89 and 65/62 kDa. The 89 and 65/62 kDa subunits of EHV-2 gB contain 39 and 17 kDa of N-linked oligosaccharides, respectively, and do not contain any O-linked oligosaccharides. Western blot analysis of purified EHV-2 virions established that gB exists as a 320 kDa dimer in the virion envelope.