TGF-β1/CTGF信号转导通路在百草枯中毒致MRC5细胞损伤中的作用
TGF-β1/CTGF信号转导通路在百草枯中毒致MRC5细胞损伤中的作用
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DOI：
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
黄敏
中科院分区：
文献类型：
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作者：
李宏辉;蔡倩;王亚鹏;刘贺荣;黄敏
目的 观察百草枯(PQ)染毒对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的影响，探讨PQ中毒致肺纤维化中转化生长因子β1(TGF-β1)/结缔组织生长因子(CTGF)信号转导通路的作用。方法 体外培养MRC-5细胞，终浓度0、12.5、25、50、100、200、400μmol/LPQ处理细胞24h，MTT检测细胞存活率。终浓度0、25、50、100μmol/LPQ处理细胞24h，酶联免疫吸附(ELISA)检测细胞TGF-β1蛋白表达水平。为了观察PQ染毒对TGF-β1/CTGF信号通路的影响，将MRC-5细胞分为正常对照组、25、50、100μmol/L PQ染毒组、TGF-β1阳性对照组(50μmol/L Recombinant Human TGF-β1； rhTGF-β1)、TGF-β1刺激组(100μmol/LPQ+50μmol/LTGF-β1)，免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、CTGF蛋白表达水平，实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测CTGF mRNA表达水平。结果 与对照组比较，MRC-5细胞存活率随着PQ剂量增加明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)，呈剂量依赖性。ELISA显示，与对照组比较，PQ浓度为 25、50、100μmol/L染毒能够诱导MRC-5细胞培养液中TGF-β1 蛋白表达水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，但诱导作用呈非剂量依赖方式。Western blot显示，25、50、100μmol/LPQ染毒组p-Smad2、p-Smad3蛋白表达明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)， TGF-β1刺激组p-Smad2、p-Smad3蛋白量达到最多，与染毒组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR显示，各个剂量PQ染毒组均能诱导CTGF mRNA表达明显升高，与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)，共同刺激组的CTGF mRNA表达较正常对照组明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。的2.75倍。与对照组比较，50、100μmol/LPQ染毒组的CTGF蛋白明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，TGF-β1刺激组的CTGF蛋白表达量最高。结论 TGF-β1/Smad信号通路激活，调控下游靶基因CTGF介导TGF-β1的促纤维化效应，在PQ致肺纤维化中发挥重要作用。