Yeast actin with a mutation in the "hydrophobic plug" between subdomains 3 and 4 (L266D) displays a cold-sensitive polymerization defect
Yeast actin with a mutation in the "hydrophobic plug" between subdomains 3 and 4 (L266D) displays a cold-sensitive polymerization defect
复制标题
子结构域 3 和 4 (L266D) 之间的“疏水塞”发生突变的酵母肌动蛋白表现出冷敏聚合缺陷
DOI：
--
复制
发表时间：
1993
影响因子：
7.8
通讯作者：
P. Rubenstein
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Xin Chen;R. Cook;P. Rubenstein
Holmes等人。(福尔摩斯，K.C.，D.Popp，W.Gebhard和W.1990年。性质[长]347：44-49)假设，在肌动蛋白的3和4亚区之间是一个由10个氨基酸组成的环，其中包括一个四个残基的疏水插头，该插头插入由相对链上的两个相邻单体形成的疏水口袋，从而稳定了F-肌动蛋白螺旋。为了验证这一假设，我们创建了一个突变的酵母肌动蛋白(L266D)，通过用Asp取代Plug中的Leu266来破坏这种假设的疏水相互作用。只表达该突变肌动蛋白的单倍体细胞在20摄氏度以上的温度下可以存活，没有明显的表型变化，但与野生型细胞相比，单倍体细胞对生长具有中等的冷敏感性。在4℃时，聚合的临界浓度是野生型肌动蛋白的10倍。聚合成核相的长度随温度的降低而增加。在4摄氏度时，几乎检测不到成核。添加鬼臼乙素稳定的F-肌动蛋白核和鬼臼乙素恢复了L266D肌动蛋白在4℃下聚合的能力。这种突变也影响聚合过程中的总伸长率。突变对G-肌动蛋白的ATP交换率、G-肌动蛋白固有的ATPase活性和肌球蛋白S1ATPase活性的激活影响不大。圆二色谱测量表明，突变的肌动蛋白的熔融温度从57摄氏度下降到42摄氏度，下降了15摄氏度。我们的结果与Holmes等人的模型一致。(福尔摩斯，K.C.，D.Popp，W.Gebhard和W.1990年。大自然[长]。347：44-49)涉及疏水插头在肌动蛋白细丝稳定中的作用。
Holmes et al. (Holmes, K. C., D. Popp, W. Gebhard, and W. Kabsch. 1990. Nature [Lond.] 347: 44-49) hypothesized that between subdomains 3 and 4 of actin is a loop of 10 amino acids including a four residue hydrophobic plug that inserts into a hydrophobic pocket formed by two adjacent monomers on the opposing strand thereby stabilizing the F- actin helix. To test this hypothesis we created a mutant yeast actin (L266D) by substituting Asp for Leu266 in the plug to disrupt this postulated hydrophobic interaction. Haploid cells expressing only this mutant actin were viable with no obvious altered phenotype at temperatures above 20 degrees C but were moderately cold-sensitive for growth compared with wild-type cells. The critical concentration for polymerization increased 10-fold at 4 degrees C compared with wild-type actin. The length of the nucleation phase of polymerization increased as the temperature decreased. At 4 degrees C nucleation was barely detectable. Addition of phalloidin-stabilized F-actin nuclei and phalloidin restored L266D actin's ability to polymerize at 4 degrees C. This mutation also affects the overall rate of elongation during polymerization. Small effects of the mutation were observed on the exchange rate of ATP from G-actin, the G-actin intrinsic ATPase activity, and the activation of myosin S1 ATPase activity. Circular dichroism measurements showed a 15 degrees C decrease in melting temperature for the mutant actin from 57 degrees C to 42 degrees C. Our results are consistent with the model of Holmes et al. (Holmes, K. C., D. Popp, W. Gebhard, and W. Kabsch. 1990. Nature [Lond.]. 347:44-49) involving the role of the hydrophobic plug in actin filament stabilization.
登录
查看更多内容
通过向酵母肌动蛋白 NH2 末端添加带负电荷的残基，增强对肌球蛋白亚片段 1 ATP 酶活性的刺激。
DOI：
--
发表时间：
1993
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Cook,RK;Root,D;Miller,C;Reisler,E;Rubenstein,PA
通讯作者：
Rubenstein,PA
焓和熵对肌动蛋白稳定性的贡献：量热法、圆二色性、荧光研究和钙的影响。
影响因子：
2.9
作者：
Bertazzon,A;Tian,GH;Lamblin,A;Tsong,TY
通讯作者：
Tsong,TY
DOI：
10.1073/pnas.83.21.8069
发表时间：
1986-11-01
影响因子：
11.1
作者：
BALDWIN, RL
通讯作者：
BALDWIN, RL
酵母的免疫荧光方法。
影响因子：
--
作者：
Pringle,JR;Adams,AE;Drubin,DG;Haarer,BK
通讯作者：
Haarer,BK
影响因子：
3.3
作者：
K. F. Wertman;D. Drubin;D. Botstein
通讯作者：
K. F. Wertman;D. Drubin;D. Botstein