Human-rabbit Hybrid Translation System to Explore the Function of Modified Ribosomes.
Human-rabbit Hybrid Translation System to Explore the Function of Modified Ribosomes.
复制标题
人类兔混合翻译系统，以探索改良的核糖体的功能。
DOI：
10.21769/bioprotoc.4714
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发表时间：
2023-07-05
期刊：
影响因子：
0.8
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
体外翻译系统是研究翻译调控的一种有用的生化工具。尽管从哺乳动物中制备具有免疫活性的细胞提取物经常是一个挑战，但市售的兔网织红细胞裂解物（RRL）是一个例外。然而，它的有效使用，研究翻译机制，如核糖体在RRL，提出了一个分析障碍。为了克服这个问题，已经开发了基于将纯化的人核糖体补充到核糖体耗尽的RRL中的杂交翻译系统。在这里，我们描述了这个系统的一步一步的协议，研究翻译驱动的核糖体缺乏翻译后修饰的核糖体蛋白。此外，我们将这种方法与先前开发的报告mRNA相结合，以评估翻译延伸的持续合成能力。该方案可用于研究异源核糖体的效力。
In vitro translation systems are a useful biochemical tool to research translational regulation. Although the preparation of translation-competent cell extracts from mammals has often been a challenge, the commercially available rabbit reticulocyte lysate (RRL) is an exception. However, its valid use, investigating the mechanism of translation machinery such as ribosomes in RRL, presents an analytic hurdle. To overcome this issue, the hybrid translation system, which is based on the supplementation of purified human ribosomes into ribosome-depleted RRL, has been developed. Here, we describe the step-by-step protocol of this system to study translation driven by ribosomes lacking post-translational modifications of the ribosomal protein. Moreover, we combined this approach with a previously developed reporter mRNA to assess the processivity of translation elongation. This protocol could be used to study the potency of heterologous ribosomes.
影响因子：
14.9
作者：
Kisly I;Kattel C;Remme J;Tamm T
通讯作者：
Tamm T
DOI：
10.1261/rna.078852.121
发表时间：
2021-12
期刊：
RNA (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Trainor BM;Pestov DG;Shcherbik N
通讯作者：
Shcherbik N