绵羊ARHGAP36 全长cDNA的克隆及其蛋白在睾丸精细管中的分布检测
绵羊ARHGAP36 全长cDNA的克隆及其蛋白在睾丸精细管中的分布检测
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DOI：
10.3969/j.issn.2095-1736.2015.02.001
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
邢万金
中科院分区：
文献类型：
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作者：
白雪;王连庆;邢万金
ARHGAP36是Rho GAPs家族的一员，在成神经管细胞瘤中超表达，可能参与调节细胞增殖。为了研究ARHGAP36在羊精子发生过程中的作用，本文采用RACE（rapid amplification of cDNA ends）技术从绵羊睾丸组织中克隆了SARHGAP36的cDNA全长序列。内部区域cDNA序列与5’RACE 和3’RACE扩增的两端序列测序后拼接，得到了2698 bp的绵羊ARHGAP36 cDNA全长，其中包含一个1593 bp的开放阅读框（ORF），编码530 aa，与UniProt中预测的牛ARHGAP36氨基酸序列（A7MB27）同源性为98%，说明我们克隆的cDNA是Rho GAP家族的成员ARHGAP36。对所克隆的绵羊ARHGAP36的氨基酸序列和UniProt数据库中所收集的所有其它ARHGAP成员的氨基酸序列比对分析显示，ARHGAP36没有其它ARHGAP成员都有的标志性“精氨酸指”基序，而它的对应基序中的保守精氨酸残基被苏氨酸替代了，暗示ARHGAP36很可能并不依靠酶催化活性发挥其功能。当我们把所克隆的cDNA与GenBank中发布的绵羊Arhgap36基因序列比对时发现绵羊Arhgap36基因组测序结果的第一个外显子中缺少一小段DNA，导致如果用该基因组序列预测绵羊ARHGAP36的cDNA的话，无法得到能编码正确氨基酸的cDNA，因此，本实验为进一步研究ARHGAP36这个特殊ARHGAP成员的功能提供了正确的cDNA序列。绵羊睾丸总蛋白Western blot检测发现绵羊睾丸内的ARHGAP36有三种长度，免疫组织化学检测发现ARHGAP36蛋白在绵羊睾丸精细管中的精子发生过程中各类细胞中都有分布。