Reconstitution of the Deinococcus radiodurans aposuperoxide dismutase.
Reconstitution of the Deinococcus radiodurans aposuperoxide dismutase.
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耐辐射奇球菌脱辅基超氧化物歧化酶的重建。
DOI：
10.1016/0003-9861(91)90038-k
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发表时间：
1991
影响因子：
3.9
通讯作者：
Gregory,EM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Juan,JY;Keeney,SN;Gregory,EM
耐辐射奇球菌是一种抗辐射需氧菌，合成了 43,000Mr 二聚体超氧化物歧化酶。全酶的 SPact 为 3300 U/mg，每摩尔二聚体含有 1.5 g 原子 Mn、0.6 g 原子 Fe 和 0.1 g 原子 Zn。脱辅基蛋白是通过在变性剂加螯合剂中透析全酶制备的，然后在螯合处理的 Tris 氯化物缓冲液中复性，在 1 mmMnCl2 中孵育后迅速恢复超氧化物歧化活性。重构取决于 Mn 浓度和 pH 值。 Mn 重组蛋白的 sp act 为 3560 U/mg，每摩尔二聚体含有 1.7 g 原子 Mn。全酶和 Mn 重建的脱辅基蛋白在 10% 丙烯酰胺凝胶中以相同的模式迁移，并在等电聚焦时聚焦到相同的模式。全酶、Mn 重建的脱辅基蛋白和复性脱辅基蛋白的荧光发射最大值为 329 ± 1 nm，但与变性脱辅基蛋白 (352 nm) 不同。脱辅基蛋白分别与 1 mM ZnSO4 和 Fe(NH4)2(SO4)2 一起孵育，每摩尔二聚体结合 1.7 g 原子 Zn 和 3-7 g 原子 Fe。虽然锌和铁都不能恢复超氧化物歧化活性，但亚铁和锌盐抑制脱辅基蛋白与锰的重建。向复性的脱辅基超氧化物歧化酶添加金属提供了一种重建原核生物超氧化物歧化酶的新方法。
Deinococcus radiodurans, a radiation-resistant aerobe, synthesized a 43,000Mrdimeric superoxide dismutase. The holoenzyme, sp act 3300 U/mg, contained 1.5 g-atoms Mn, 0.6 g-atom Fe, and 0.1 g-atom Zn per mole dimer. Apoprotein, prepared by dialysis of the holoenzyme in denaturant plus chelator and then renatured in chelex-treated Tris chloride buffer, rapidly regained superoxide dismuting activity upon incubation in 1 mmMnCl2. Reconstitution was dependent on Mn concentration and pH. The Mn-reconstituted protein, sp act 3560 U/mg, contained 1.7 g-atoms Mn per mole dimer. The holoenzyme and Mn-reconstituted apoprotein migrated with the same patterns in 10% acrylamide gels and focused to the same pattern upon isoelectric focusing. Fluorescence emission maxima of the holoenzyme, Mn-reconstituted apoprotein, and the renatured apoprotein were 329 ± 1 nm but differed from the denatured apoprotein (352 nm). Apoprotein bound 1.7 g-atoms Zn and from 3–7 g-atoms Fe per mole dimer on incubation with 1 mM ZnSO4and Fe(NH4)2(SO4)2, respectively. Although neither Zn nor Fe restored superoxide dismuting activity, the ferrous and the zinc salt inhibited reconstitution of the apoprotein with manganese. Metal addition to renatured aposuperoxide dismutase offers a novel approach to reconstitution of procaryote superoxide dismutases.