Evidence from electron paramagnetic resonance for function-related conformation changes in the anion-transport protein of human erythrocytes.
Evidence from electron paramagnetic resonance for function-related conformation changes in the anion-transport protein of human erythrocytes.
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来自电子顺磁共振的证据表明人红细胞阴离子转运蛋白的功能相关构象变化。
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1981.tb05177.x
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发表时间：
1981
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Grisham,CM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ginsburg,H;O'Connor,SE;Grisham,CM
参与阴离子转运的红细胞膜蛋白（带 3）以渗漏囊泡的形式在其天然脂质环境中分离出来，然后用 N-(1-氧基-2,2,6,6-四甲基-4-哌啶基)-马来酰亚胺 (MalMe4PipO) 自旋标记。由此产生的带 3 结合的 MalMe4PipO 的电子顺磁共振谱被分解为快速翻滚分量和另一个相对固定的分量。由移动组分 (Q) 贡献的信号百分比对已知影响红细胞阴离子转运的各种特征因素敏感：Q 是氯离子浓度的双曲函数，显示与氯离子转运相似的半饱和常数 K1/2。另一方面，Q 对硫酸盐浓度显示出双相响应，与硫酸盐对阴离子修饰位点相对较高的亲和力一致。Q 是 pH 值的饱和函数，无论存在 Cl− 还是 SO−24，显示出 pH 6.0 和 6.5 之间的 pKa，与 Cl− 和 SO−24 传输的 pH 滴定曲线类似。用阴离子转运共价抑制剂 4-乙酰氨基-4'-异硫氰芪-2,2'-二磺酸处理的自旋标记囊泡明显不易受 CI-浓度变化的影响。这表明与 band-3 蛋白共价结合的 MalMe4PipO 的电子顺磁共振谱报告了与该蛋白的阴离子转运功能相关的构象变化。
The erythrocyte membrane protein involved in anion transport (band 3) wits isolated in its native lipid milieu in the form of leaky vesicles and then was spin‐labelled withN‐(1‐oxyl‐2,2,6,6‐tetramethyl‐4‐piperidinyl)‐maleimide (MalMe4PipO). The resulting electron paramagnetic resonance spectrum of band‐3‐bound MalMe4PipO was resolved into rapid tumbling component and another, relatively immobile component. The percentage of the signal contributed by the mobile component (Q), was sensitive to various characteristic factors known to affect erythrocyte anion transport:Qwas a hyperbolic function of chloride concentration displaying a half saturation constantK1/2similar to that of chloride transport. On the other handQshowed a biphasic response to sulfate concentration, in line with the relatively high affinity of sulfate for the anion modifier site.Qwas a saturable function of pH, either in presence of Cl−or SO−24, showing a pKabetween pH 6.0 and 6.5, in analogy with the pH titration curve of Cl−and SO−24transport. Spin‐labelled vesicles treated with a covalent inhibitor of anion transport, 4‐acetamido‐4′‐isothiocyanostilbene‐2,2′‐disulfonic acid, were markedly less susceptible to changes in CI−concentration. It is suggested that the electron paramagnetic resonance spectrum of MalMe4PipO covalently bound to the band‐3 protein, reports conformational changes which are related to the anion‐transport function of this protein.
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