薏苡黑穗病快速检测方法研究
薏苡黑穗病快速检测方法研究
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DOI：
10.3969/j.issn.0517
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
周明强
中科院分区：
文献类型：
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作者：
王健;杨成龙;杨小雨;周明强
以薏苡黑穗病菌粉胞内蛋白为免疫原，制备抗体，建立薏苡黑穗病 ELISA 检测方法。结果表明，测定纯化后抗体的最高效价为 1 ∶ 800 000，具特异性强; 方阵试验测定抗原的最佳包被浓度为 103 CFU/mL，抗体的工作浓度为 1 ∶4 000; 优化 ELISA 检测条件，确定抗体4 ℃过夜( 8～12 h) 包被效果最好，选择 1%酪蛋白作为抗体的封闭液，抗体的最佳封闭时间为 1．5 h，抗体的最佳孵育时间为 2．5 h，最佳底物作用时间为 15 min; 建立 ELISA 标准工作曲线，表明抗体的灵敏度为 104 CFU/mL。ELISA 检测田间采集的黑穗病病叶显示，抗体可与病叶提取液发生特异性反应，而与健康叶提取液呈阴性反应，由此可确定黑穗病的存在与否。该方法可用于田间薏苡黑穗病快速检测，以及时指导病害防治。