Use of recombinant protein to identify a motif-negative human cytotoxic T-cell epitope presented by HLA-A2 in the hepatitis C virus NS3 region
Use of recombinant protein to identify a motif-negative human cytotoxic T-cell epitope presented by HLA-A2 in the hepatitis C virus NS3 region
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使用重组蛋白鉴定丙型肝炎病毒 NS3 区域中 HLA-A2 呈递的基序阴性人类细胞毒性 T 细胞表位
DOI：
10.1128/jvi.70.1.232-240.1996
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发表时间：
1996
影响因子：
5.4
通讯作者：
J. Berzofsky
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
K. Kurokohchi;T. Akatsuka;C. D. Pendleton;A. Takamizawa;M. Nishioka;M. Battegay;S. Feinstone;J. Berzofsky
为了确定细胞毒性T细胞（CTL）表位，涉及使用覆盖整个蛋白质序列的一系列重叠的合成肽的常见方法对于大蛋白质是不切实际的。基序只能识别一小部分表位。为了鉴定丙型肝炎病毒（HCV）NS 3区的人CTL表位，我们修改了使用重组蛋白和短肽结合I类主要组织相容性复合体（MHC）分子的能力的方法。用重组NS 3蛋白的蛋白水解消化物刺激来自HCV感染患者的外周血单核细胞，以将CTL扩增至消化物中的任何活性肽。通过反相高效液相色谱法对消化物进行分级，并评估各级分对CTL裂解的靶点致敏的能力。对最具活性的级分进行测序，鉴定出15个残基的肽（NS 3 - 1 J; TITTGAPVTYSTYGK）。通过合成相应的肽，证实该序列是活性的来源。用合成肽体外刺激两名HCV感染患者（HLA-A2和-B7均阳性），建立了NS 3 - 1 J特异性CTL细胞系。CTL是HLA-A2限制性的，并且最小表位定位于十肽NS 3 - 1 J（10.4）。由于该最小表位缺乏常见的HLA-A2结合基序，因此该技术可用于独立于已知基序的CTL表位作图，并且不需要大量的重叠肽。由于这种肽是由最常见的HLA I类分子呈递的，几乎有一半的人都有这种分子，因此它可能是抗HCV疫苗的有用成分。
To define cytotoxic T-cell (CTL) epitopes, the common approach involving the use of a series of overlapping synthetic peptides covering the whole protein sequence is impractical for large proteins. Motifs identify only a fraction of epitopes. To identify human CTL epitopes in the NS3 region of hepatitis C virus (HCV), we modified an approach using recombinant protein and the ability of short peptides to bind to class I major histocompatibility complex (MHC) molecules. Peripheral blood mononuclear cells from an HCV-infected patient were stimulated with a proteolytic digest of the recombinant NS3 protein to expand CTL to any active peptides in the digest. The digest was fractionated by reverse-phase high-performance liquid chromatography, and fractions were assessed for the ability to sensitize targets for lysis by CTL. The most active fraction was sequenced, identifying a 15-residue peptide (NS3-1J; TITTGAPVTYSTYGK). This sequence was confirmed to be the source of the activity by synthesis of the corresponding peptide. CTL lines specific for NS3-1J were established from two HCV-infected patients (both HLA-A2 and -B7 positive) by stimulation with the synthetic peptide in vitro. The CTL were HLA-A2 restricted, and the minimal epitope was mapped to a decapeptide NS3-1J (10.4). As this minimal epitope lacks the common HLA-A2-binding motif, this technique is useful for mapping CTL epitopes independent of known motifs and without the requirement for enormous numbers of overlapping peptides. Because this peptide is presented by the most common HLA class I molecule, present in almost half the population, it might be a useful component of a vaccine against HCV.
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影响因子：
56.9
作者：
HUNT, DF;HENDERSON, RA;ENGELHARD, VH
通讯作者：
ENGELHARD, VH
体内克隆病毒特异性细胞毒性 T 淋巴细胞的效率和有效性。
DOI：
--
发表时间：
1989
期刊：
Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)
影响因子：
--
作者：
Klavinskis,LS;Tishon,A;Oldstone,MB
通讯作者：
Oldstone,MB
影响因子：
4.4
作者：
Mark Gavin;Mark J. Gilbert;Stanley R. Riddell;Philip D. Greenberg;Michael J. Bevan
通讯作者：
Mark Gavin;Mark J. Gilbert;Stanley R. Riddell;Philip D. Greenberg;Michael J. Bevan
IL-4促进人T淋巴细胞增殖。
DOI：
--
发表时间：
1989
期刊：
Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)
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--
作者：
Mitchell,LC;Davis,LS;Lipsky,PE
通讯作者：
Lipsky,PE
对丙型肝炎病毒肽具有特异性的 HLA-A2.1 转基因小鼠的 CTL 反应可预测携带 HLA-A2.1 的人类 CTL 的表位。
DOI：
--
发表时间：
1995
期刊：
Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)
影响因子：
--
作者：
Shirai,M;Arichi,T;Nishioka,M;Nomura,T;Ikeda,K;Kawanishi,K;Engelhard,VH;Feinstone,SM;Berzofsky,JA
通讯作者：
Berzofsky,JA