一种来源于喜热梭孢壳的耐热型β-甘露聚糖酶
一种来源于喜热梭孢壳的耐热型β-甘露聚糖酶
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DOI：
10.13343/j.cnki.wsxb.20200697
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
王谦
中科院分区：
文献类型：
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作者：
施鑫磊;方韵颖;尉俏女;王佳堃;斯越秀;陈忠法;钱国英;尹尚军;王谦
【目的】本文旨在挖掘满足工业加工所需的新型耐热β-甘露聚糖酶。【方法】从丝状真菌喜热梭孢壳中克隆甘露聚糖酶基因Mman1,利用毕赤酵母表达系统进行异源表达,研究重组酶的酶学性质和热处理过程中蛋白构象变化情况。【结果】序列分析显示,Mman1基因编码409个氨基酸,包含一段20个氨基酸的信号肽序列和一个GH5家族结构域;经毕赤酵母表达的重组MtMANl蛋白约为60 kDa,存在N-糖基化修饰,该酶的最适反应pH和温度分别为6.0和70°C,催化刺槐豆胶底物的Km和V_(max)分别为4.28±0.73 mg/mL和203.9±14.61 µmol/(s·mg); MtMANl在60 °C下十分稳定,在80°C、90°C和100 °C下处理10 min后,分别能维持(68.23±7.47)%、(56.01±5.69)%和(14.91 ±2.92)%的残余活性,且二级结构和最大发射波长基本没有发生变化,提示其构象维持稳定;此外,该酶对较低浓度的Fe~(2+) (<0.1 mmol/L)、Cu~(2+)(<0.1 mmol/L)、Ca~(2+)(<0.5 mmol/L)、Mg~(2+)(<0.1 mmol/L)或Zn~(2+)(<0.1 mmol/L)耐受能力较强。【结论】MtMANl是一种耐热的β-甘露聚糖酶,在饲料制粒等需要高温处理的工业加工工艺中具有较好的应用前景。