A novel technique for large-fragment knock-in animal production without ex vivo handling of zygotes.
A novel technique for large-fragment knock-in animal production without ex vivo handling of zygotes.
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DOI：
10.1038/s41598-023-29468-1
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发表时间：
2023-02-08
影响因子：
4.6
通讯作者：
Ohtsuka T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Abe M;Nakatsukasa E;Natsume R;Hamada S;Sakimura K;Watabe AM;Ohtsuka T
基于 CRISPR/Cas 的基因组编辑极大地改进了基因修饰技术。原位电穿孔称为通过输卵管核酸递送进行基因组编辑（GONAD），无需离体胚胎处理，从技术上讲是最简单的基因转移方法，可以在没有发育工程专业知识（包括显微操作技术）的实验室中进行。然而，在大片段敲入（例如基因表达盒）的情况下，使用这种方法仍然具有挑战性。腺相关病毒 (AAV) 充当受感染细胞（包括啮齿动物胚胎）中同源重组的供体 DNA。在这项研究中，我们展示了将 AAV 供体和 CRISPR/Cas9 组件同时电穿孔到胚胎中以创建基因敲入动物，并使用少量动物和原位电穿孔成功生成了携带长度为 3.0 kb 的基因盒的基因敲入大鼠。这些发现表明，该技术是生产转基因啮齿动物的有效高通量策略，并且可能适用于其他动物物种。
CRISPR/Cas-based genome editing has dramatically improved genetic modification technology. In situ electroporation called genome editing via oviductal nucleic acid delivery (GONAD), which eliminates the need for ex vivo embryo handling, is technically the simplest method for gene transfer and can be performed in laboratories without developmental engineering expertise including micromanipulation techniques. However, the use of this method remains challenging in the case of large-fragment knock-in, such as gene expression cassettes. Adeno-associated viruses (AAV) act as donor DNA for homologous recombination in infected cells, including rodent embryos. In this study, we demonstrated simultaneous electroporation of AAV donors and CRISPR/Cas9 components into embryos to create knock-in animals, and successfully generated knock-in rats carrying a gene cassette with a length of 3.0 kb using a small number of animals and in situ electroporation. These findings indicate that this technique is an efficient high-throughput strategy for producing genetically modified rodents and may be applicable to other animal species.
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影响因子：
5.9
作者：
Hamada S;Nagase M;Yoshizawa T;Hagiwara A;Isomura Y;Watabe AM;Ohtsuka T
通讯作者：
Ohtsuka T
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3.5
作者：
Kobayashi T;Namba M;Koyano T;Fukushima M;Sato M;Ohtsuka M;Matsuyama M
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性腺：一种新型的CRISPR/CAS9基因组编辑方法，不需要离体处理胚胎。
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作者：
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作者：
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