Reversible Click Chemistry Tag for Universal Proteome Sample Preparation for Top-Down and Bottom-Up Analysis.
Reversible Click Chemistry Tag for Universal Proteome Sample Preparation for Top-Down and Bottom-Up Analysis.
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DOI：
10.1021/acs.jproteome.1c00443
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发表时间：
2021-10-01
影响因子：
4.4
通讯作者：
Lucas, Amber
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Biedka, Stephanie;Schmidt, Brigitte F.;Frey, Nolan M.;Boothman, Sarah M.;Minden, Jonathan S.;Lucas, Amber
关键词：
成功的蛋白质组分析需要可靠的样品准备，从蛋白质溶解开始，以无污染的样品结束，为下游分析做好准备。大多数蛋白质组样品制备技术使用沉淀法或基于过滤器的分离，这两种方法都有明显的缺点。目前的技术中没有一种能够同时制备完整的蛋白质或消化的多肽。在这里，我们介绍了一个可逆的蛋白质标签ProMTag，它能够捕获、清理和释放完整的蛋白质组，用于自上而下的分析。或者，在工作流程中添加一种新的胰酶衍生物，可产生用于自下而上分析的多肽。我们表明，ProMTag工作流程对完整蛋白质的得率为90%，对蛋白质组消化的得率为85%。对于自上而下的分析，ProMTag Cleanup提高了2D凝胶的分辨率；对于自下而上的探索，这种方法产生了可重现的质谱学结果，证明了ProMTag方法是一种真正通用的方法，可以产生与多种下游分析技术兼容的高质量蛋白质组样本。数据可通过标识符为PXD027799的ProteomeXchange获得。
Successful proteome analysis requires reliable sample preparation beginning with protein solubilization and ending with a sample free of contaminants, ready for downstream analysis. Most proteome sample preparation technologies utilize precipitation or filter-based separation, both of which have significant disadvantages. None of the current technologies are able to prepare both intact proteins or digested peptides. Here, we introduce a reversible protein tag, ProMTag, that enables whole proteome capture, cleanup, and release of intact proteins for top-down analysis. Alternatively, the addition of a novel Trypsin derivative to the workflow generates peptides for bottom-up analysis. We show that the ProMTag workflow yields >90% for intact proteins and >85% for proteome digests. For top-down analysis, ProMTag cleanup improves resolution on 2D gels; for bottom-up exploration, this methodology produced reproducible mass spectrometry results, demonstrating that the ProMTag method is a truly universal approach that produces high-quality proteome samples compatible with multiple downstream analytical techniques. Data are available via ProteomeXchange with identifier PXD027799.
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影响因子：
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通讯作者：
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DOI：
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发表时间：
2010-11-14
期刊：
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影响因子：
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通讯作者：
Fox JM
DOI：
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发表时间：
1973-01-01
期刊：
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--
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