Genome engineering in Saccharomyces cerevisiae using CRISPR-Cas systems.
Genome engineering in Saccharomyces cerevisiae using CRISPR-Cas systems.
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DOI：
10.1093/nar/gkt135
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发表时间：
2013-04
影响因子：
14.9
通讯作者：
Church GM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
DiCarlo JE;Norville JE;Mali P;Rios X;Aach J;Church GM
细菌和古菌中的成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）及CRISPR相关（Cas）系统利用RNA引导的核酸酶活性来提供针对入侵的外源核酸的适应性免疫。在此，我们报道了在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中使用II型细菌CRISPR - Cas系统进行基因组工程改造。CRISPR - Cas组分，即Cas9基因和一个设计用于靶向基因组的CRISPR引导RNA（gRNA），在酵母的内源基因组靶位点上展现出强大且特异的RNA引导的内切核酸酶活性。通过使用组成型表达的Cas9以及一个瞬时的gRNA盒，我们发现靶向双链断裂可使单链和双链寡核苷酸供体的同源重组率分别提高5倍和130倍。此外，在组成型表达Cas9的细胞中共同转化gRNA质粒和供体DNA，导致供体DNA重组频率接近100%。我们的方法为在酵母中进行位点特异性诱变和等位基因替换的一种简单而强大的基因组工程工具奠定了基础。
Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) and CRISPR-associated (Cas) systems in bacteria and archaea use RNA-guided nuclease activity to provide adaptive immunity against invading foreign nucleic acids. Here, we report the use of type II bacterial CRISPR-Cas system in Saccharomyces cerevisiae for genome engineering. The CRISPR-Cas components, Cas9 gene and a designer genome targeting CRISPR guide RNA (gRNA), show robust and specific RNA-guided endonuclease activity at targeted endogenous genomic loci in yeast. Using constitutive Cas9 expression and a transient gRNA cassette, we show that targeted double-strand breaks can increase homologous recombination rates of single- and double-stranded oligonucleotide donors by 5-fold and 130-fold, respectively. In addition, co-transformation of a gRNA plasmid and a donor DNA in cells constitutively expressing Cas9 resulted in near 100% donor DNA recombination frequency. Our approach provides foundations for a simple and powerful genome engineering tool for site-specific mutagenesis and allelic replacement in yeast.
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影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
4.8
作者：
Braglia, P;Percudani, R;Dieci, G
通讯作者：
Dieci, G
影响因子：
2.5
作者：
SCHIESTL, RH;GIETZ, RD
通讯作者：
GIETZ, RD
DOI：
10.1007/978-1-61779-331-8_12
发表时间：
2012-01-01
期刊：
UNNATURAL AMINO ACIDS: METHODS AND PROTOCOLS
影响因子：
--
作者：
Wang, Qian;Wang, Lei
通讯作者：
Wang, Lei
通过反式编码的小 RNA 和宿主因子 RNase III 进行 CRISPR RNA 成熟。
影响因子：
64.8
作者：
Deltcheva, Elitza;Chylinski, Krzysztof;Sharma, Cynthia M.;Gonzales, Karine;Chao, Yanjie;Pirzada, Zaid A.;Eckert, Maria R.;Vogel, Joerg;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle