High-Resolution NMR Studies of Human Tissue Factor.
High-Resolution NMR Studies of Human Tissue Factor.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0163206
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Rienstra CM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nuzzio KM;Watt ED;Boettcher JM;Gajsiewicz JM;Morrissey JH;Rienstra CM
在正常止血中，凝血级联反应在凝血因子VIIa（fVIIa，其他凝血因子的名称类似）与整合膜蛋白（人组织因子（TF））结合时启动。TF/fVIIa复合物继而激活fX和fIX，最终以凝块形成结束。存在TF的可溶性细胞外结构域（sTF）的几种X射线晶体结构;然而，这些结构在蛋白质的功能相关区域中缺少电子密度。在这种情况下，NMR可以提供互补的结构信息以及对酶活性的动态洞察。NMR研究的分辨率和灵敏度通过制备具有各种同位素标记模式的多毫克蛋白质的能力而大大增强。在这里，我们证明了高产生产的几种同位素标记形式的重组sTF，允许在固体和溶液状态下的高分辨率NMR研究。我们还报告了在亚mM浓度的sTF的溶液NMR光谱，确保分散的单体的存在下，以及第一固态的sTF的NMR光谱。我们改进的样品制备和沉淀条件，使收购的多维核磁共振数据集TF化学位移分配，并提供了一个基准TF结构解析。
In normal hemostasis, the blood clotting cascade is initiated when factor VIIa (fVIIa, other clotting factors are named similarly) binds to the integral membrane protein, human tissue factor (TF). The TF/fVIIa complex in turn activates fX and fIX, eventually concluding with clot formation. Several X-ray crystal structures of the soluble extracellular domain of TF (sTF) exist; however, these structures are missing electron density in functionally relevant regions of the protein. In this context, NMR can provide complementary structural information as well as dynamic insights into enzyme activity. The resolution and sensitivity for NMR studies are greatly enhanced by the ability to prepare multiple milligrams of protein with various isotopic labeling patterns. Here, we demonstrate high-yield production of several isotopically labeled forms of recombinant sTF, allowing for high-resolution NMR studies both in the solid and solution state. We also report solution NMR spectra at sub-mM concentrations of sTF, ensuring the presence of dispersed monomer, as well as the first solid-state NMR spectra of sTF. Our improved sample preparation and precipitation conditions have enabled the acquisition of multidimensional NMR data sets for TF chemical shift assignment and provide a benchmark for TF structure elucidation.
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影响因子：
1.6
作者：
REZAIE, AR;FIORE, MM;MORRISSEY, JH
通讯作者：
MORRISSEY, JH
影响因子：
64.8
作者：
HARLOS, K;MARTIN, DMA;BOYS, CWG
通讯作者：
BOYS, CWG
DOI：
10.1016/j.bbrc.2011.08.135
发表时间：
2011-10-07
影响因子：
3.1
作者：
Carlsson, Karin;Persson, Egon;Svensson, Magdalena
通讯作者：
Svensson, Magdalena
影响因子：
4.1
作者：
STONE, MJ;RUF, W;WRIGHT, PE
通讯作者：
WRIGHT, PE
影响因子：
3.4
作者：
Shi, Lichi;Lake, Evelyn M. R.;Ladizhansky, Vladimir
通讯作者：
Ladizhansky, Vladimir