Effect of trypsin binding on the hydrogen exchange kinetics of bovine pancreatic trypsin inhibitor .beta.-sheet NH's
Effect of trypsin binding on the hydrogen exchange kinetics of bovine pancreatic trypsin inhibitor .beta.-sheet NH's
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胰蛋白酶结合对牛胰腺胰蛋白酶抑制剂β-折叠NH的氢交换动力学的影响
DOI：
10.1021/bi00304a028
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发表时间：
1984
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
C. Woodward
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
I. Simon;E. Tüchsen;C. Woodward
在pH 9- 10，2540 ℃下，测定了游离牛胰蛋白酶抑制剂（BPTI）和胰蛋白酶-BPTI复合物中最慢交换@-折叠NH ′ s的氢-氘交换速率。单个质子的速率常数已从它们在1H NMR谱中的指定共振测量。胰蛋白酶结合具有高度局部化效应;水氢和不稳定蛋白质氢之间的Tyr-35 NH交换x e同位素交换是溶剂对蛋白质内部位点的可及性的量度。蛋白质中最大的可交换质子群是肽NH。在pH 3和25 ℃下，延伸多肽中NH的交换速率常数约为10 - 1 min-1，而在相同条件下折叠蛋白中NH的交换速率常数约为10 - 1 min-1。来自明尼苏达大学生物化学系，圣保罗，明尼苏达55 108。1983年9月23日收到。由赠款NSF PCM 8101993和NIH GM 26242支持。匈牙利科学院生物研究中心酶学研究所，匈牙利布达佩斯H-1502。* 当前地址：在复合物中速率减慢> 10 3倍，而测量的其他NH减慢3-15倍。在游离BPTI中，在交换速率常数具有11-32 kcal/mol范围内的活化能的条件下，Tyr-21、Phe-22和Tyr-23的NH比其它的慢几个数量级，s Englander等人，1972年;伍德沃德和希尔顿，1979年;伍德沃德等人，1982;巴克斯代尔和罗森伯格，1982）。传统上，蛋白质氢交换动力学的测量对所有可交换质子进行平均（Englander & Englander，1978）。最近，已通过快速蛋白质水解方法将平均NH交换率分配给蛋白质序列片段（Rosa &理查兹，1981年; Englander等人，1980年）。现在，随着用于指定NMR NH共振的程序的发展（Dubs等人，1979年; Delpierre等人，1982年;岛和鲍德温，1983年），它是0006-2960/84/0423- 2064$01.SO10
The hydrogen-deuterium exchange rates of the slowest exchanging @-sheet NH’s in the bovine pancreatic trypsin inhibitor (BPTI) have been determined in free BPTI and in the trypsin-BPTI complex at pH 9-10,2540 OC. Rate constants for individual protons have been measured from their assigned resonances in the ‘H NMR spectrum. Trypsin binding has a highly localized effect; the Tyr-35 N H exchange x e exchange of isotope between water hydrogens and labile protein hydrogens is a measure of the accessibility of solvent to the protein’s internal sites. The largest group of exchangeable protons in proteins are peptide NH’s. Exchange rate constants of NH’s in extended polypeptides at pH 3 and 25 OC are around IO-’ min-’, while exchange rate constants of NH’s in folded proteins under the same conditions vary from about lo-’ to min-I. Although labile protons in folded From the Department of Biochemistry, University of Minnesota, St. Paul, Minnesota 55 108. Received September 23, 1983. Supported by Grants NSF PCM8101993 and NIH GM26242. Institute of Enzymology, Biological Research Center, Hungarian Academy of Sciences, H-1502 Budapest, Hungary. *Present address: rate is slowed by a factor of > lo3 in the complex, while the other NH’s measured are slowed by a factor of 3-15. In free BPTI, under conditions where the exchange rate constants have activation energies in the range 11-32 kcal/mol, the NH’s of Tyr-21, Phe-22, and Tyr-23 are several orders of magnitude slower than the other ,s Englander et al., 1972; Woodward & Hilton, 1979; Woodward et al., 1982; Barksdale & Rosenberg, 1982). Traditionally, measurements of protein hydrogen exchange kinetics average over all exchangeable protons (Englander & Englander, 1978). More recently, assignments of average NH exchange rates to segments of the protein sequence have been made by rapid proteolysis methods (Rosa & Richards, 1981; Englander et al., 1980). Now, with the development of procedures for assigning NMR N H resonances (Dubs et al., 1979; Delpierre et al., 1982; Kuwajima & Baldwin, 1983), it is 0006-2960/84/0423-2064$01 .SO10
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