Probing Cdc42 Polarization Dynamics in Budding Yeast Using a Biosensor.
Probing Cdc42 Polarization Dynamics in Budding Yeast Using a Biosensor.
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DOI：
10.1016/bs.mie.2017.01.011
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发表时间：
2017
影响因子：
--
通讯作者：
Park HO
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Okada S;Lee ME;Bi E;Park HO
Cdc42 是一种小型鸟苷三磷酸酶 (GTPase)，在多种细胞类型的极性发育中发挥着核心作用。由于Cdc42的活性在时间和空间上是动态控制的，因此需要开发生物传感器来监测其在体内的激活。在本章中，我们描述了一种简单而强大的生物传感器的构建和使用，用于监测芽殖酵母中的活性 Cdc42。这种基于亲和力的生物传感器使用与 Cdc42 效应蛋白之一的 Cdc42 和 Rac 相互作用结合 (CRIB) 基序融合的红色荧光蛋白。由于它与 GTP 结合的 Cdc42 特异性结合，因此该生物传感器可用于监测体内 Cdc42 的激活。由于 GTPase 靶标中存在保守的 CRIB 基序，这种或类似的生物传感器可广泛用于研究其他细胞类型中的 GTPase 信号传导。
Cdc42 is a small guanosine triphosphatase (GTPase) that plays a central role in polarity development in diverse cell types. Since the activity of Cdc42 is dynamically controlled in time and space, it is required to develop a biosensor to monitor its activation in vivo. In this chapter, we describe the construction and usage of a simple and robust biosensor for monitoring active Cdc42 in budding yeast. This affinity-based biosensor uses a red fluorescent protein fused to a Cdc42- and Rac-interactive binding (CRIB) motif from one of the Cdc42 effector proteins. Because it binds specifically to the GTP-bound Cdc42, this biosensor can be used to monitor Cdc42 activation in vivo. This or similar biosensors can be widely used for studying GTPase signaling in other cell types because of the conserved CRIB motif present among GTPase targets.