Discrepancy between fluorescence correlation spectroscopy and fluorescence recovery after photobleaching diffusion measurements of G-protein-coupled receptors.
Discrepancy between fluorescence correlation spectroscopy and fluorescence recovery after photobleaching diffusion measurements of G-protein-coupled receptors.
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DOI：
10.1016/j.ab.2013.04.033
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发表时间：
2013-09-01
影响因子：
2.9
通讯作者：
Scarlata S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Calizo RC;Scarlata S
光漂白后荧光恢复（FRAP）和荧光相关光谱（FCS）是测量完整活细胞中分子扩散的两种最直接的方法。理想情况下，这些方法应该对相同的系统产生类似的结果。我们已经使用这些方法来监测扩散的两个G-蛋白偶联受体和它们的相关蛋白质的细胞质膜，不包含或不包含内陷蛋白质结构域称为小窝。FRAP研究表明，小窝结构域增加受体的不动部分，而不显着改变其流动性。另一方面，FCS研究表明，一个意想不到的增加小窝相关蛋白的流动性。我们的数据表明，小窝域的几何形状引起其所附的蛋白质的受限扩散，导致流动性明显增加。
Fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) and fluorescence correlation spectroscopy (FCS) are the two most direct methods to measure the diffusion of molecules in intact living cells. Ideally, these methods should produce similar results for an identical system. We have used these methods to monitor the diffusion of two G-protein-coupled receptors and their associated proteins in the plasma membranes of cells that do not or do contain invaginated protein domains called caveolae. FRAP studies show that caveolae domains increase the immobile fraction of receptors without significantly changing their mobility. On the other hand, FCS studies show an unexpected increase the mobility of caveolae-associated proteins. Our data suggest that the geometry of caveolae domains gives rise to a confined diffusion of its attached proteins, resulting in an apparent increase in mobility.
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