Using riboswitches to regulate gene expression and define gene function in mycobacteria.
Using riboswitches to regulate gene expression and define gene function in mycobacteria.
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使用核糖开关调节基因表达并定义分枝杆菌中的基因功能。
DOI：
10.1016/bs.mie.2014.10.034
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发表时间：
2015
影响因子：
--
通讯作者：
Seeliger, Jessica C.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Van Vlack, Erik R.;Seeliger, Jessica C.
分枝杆菌包括环境物种和许多病原性物种，例如结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis），其是人类结核病的病原体的细胞内病原体。在体外培养和宿主细胞感染中，诱导型基因表达是检测基因功能和重要性的有力工具。茶碱诱导的人工核糖开关最近出现作为一种替代蛋白质阻遏物为基础的系统。核糖开关是一个受调控的基因，与分枝杆菌启动子结合，提供转录控制。我们在这里提供了我们的实验室所使用的方法来表征核糖开关反应茶碱在报告菌株，重组生物体含有核糖开关调节的内源性基因，并在宿主细胞感染。这些协议应促进现有的和新的人工核糖开关在分枝杆菌中的基因功能的探索应用。
Mycobacteria include both environmental species and many pathogenic species such as Mycobacterium tuberculosis, an intracellular pathogen that is the causative agent of tuberculosis in humans. Inducible gene expression is a powerful tool for examining gene function and essentiality, both in in vitro culture and in host cell infections. The theophylline-inducible artificial riboswitch has recently emerged as an alternative to protein repressor-based systems. The riboswitch is translationally regulated and is combined with a mycobacterial promoter that provides transcriptional control. We here provide methods used by our laboratory to characterize the riboswitch response to theophylline in reporter strains, recombinant organisms containing riboswitch-regulated endogenous genes, and in host cell infections. These protocols should facilitate the application of both existing and novel artificial riboswitches to the exploration of gene function in mycobacteria.
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