A procedure for in situ alkylation of cystine residues on glass fiber prior to protein microsequence analysis.
A procedure for in situ alkylation of cystine residues on glass fiber prior to protein microsequence analysis.
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在蛋白质微序列分析之前对玻璃纤维上的胱氨酸残基进行原位烷基化的程序。
DOI：
10.1016/0003-2697(87)90484-2
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发表时间：
1987
影响因子：
2.9
通讯作者：
Dixon,JE
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Andrews,PC;Dixon,JE
描述了一种在肽的气相测序过程中提供高产率的吡啶基乙基化半胱氨酸的方法。该方法通过减少肽测序之前还原、烷基化所需的转移步骤的数量来减少转移损失。与气相测序仪中使用的聚凝胺涂层玻璃纤维过滤器结合的蛋白质可以直接在过滤器上进行还原、吡啶基乙基化和测序。使用非亲核还原剂三丁基膦进行含胱氨酸肽的还原[U. T. Rüegg和J. Rudinger（1977），酶学方法（Hirs，C. H. W.，和Timasheff，S. N.，编），Vol. 47，pp. 111-116，Academic Press，纽约]，同时在可溶于有机相的缓冲液中通过4-乙烯基吡啶进行烷基化。通过干燥过滤器并用氯丁烷短暂洗涤来除去过量试剂和缓冲液。在所述条件下，N-烷基化是不明显的，也没有任何氨基酸侧链被修饰。该方法提供高收率，并且当必须还原和烷基化亚纳摩尔水平的材料时特别有用。
A procedure is described which provides high yields of pyridylethylated cysteine during gas-phase sequencing of peptides. The method decreases transfer losses by reducing the number of transfer steps required for reduction, alkylation, prior to sequencing a peptide. Proteins bound to polybrene-coated glass-fiber filters used in a gas-phase sequenator may be reduced, pyridylethylated, and sequenced directly on the filter. Reduction of cystine-containing peptides is performed using the nonnucleophilic reductant, tributylphosphine [U. T. Rüegg and J. Rudinger (1977)in Methods in Enzymology (Hirs, C. H. W., and Timasheff, S. N., Eds.), Vol. 47, pp. 111–116, Academic Press, New York] with concomitant alkylation by 4-vinylpyridine in a buffer soluble in the organic phase. Excess reagents and the buffer are removed by drying the filter and briefly washing with chlorobutane. No N-alkylation is apparent under the conditions described, nor are any amino acid side chains modified. The procedure affords high yields and is particularly useful when subnanomole levels of material must be reduced and alkylated.
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DOI：
--
发表时间：
1985
期刊：
European Journal of Biochemistry
影响因子：
--
作者：
Joël Vandekerchove;G. Bauw;M. Puype;Jozef Van Damme;M. V. Montagu
通讯作者：
M. V. Montagu
影响因子：
2.9
作者：
CAVINS, JF;FRIEDMAN, M
通讯作者：
FRIEDMAN, M
从 mRNA 序列预测肽激素的分离和结构。
DOI：
--
发表时间：
1981
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Andrews,PC;Dixon,JE
通讯作者：
Dixon,JE
影响因子：
4.8
作者：
R. Aebersold;D. Teplow;L. Hood;S. Kent
通讯作者：
S. Kent