光敏Z亲和肽-碱性磷酸酶重组蛋白的构建及其生物学活性研究

光敏Z亲和肽-碱性磷酸酶重组蛋白的构建及其生物学活性研究
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DOI：
10.3969/j.issn.1000-484x.2021.13.014
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发表时间：
2021
期刊：
中国免疫学杂志
影响因子：
--
通讯作者：
唐金宝
唐金宝
中科院分区：
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文献类型：
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作者：
于晓甜;张晓坤;高晓艺;杨洪鸣;唐金宝

文献摘要

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目的:构建并表达含光敏基团(对苯甲酰苯丙氨酸,Bpa)的Z亲和肽-碱性磷酸酶(Z_(Bpa) -AP)重组蛋白,并研究其生物学活性。方法:基因工程技术构建Z亲和肽(第17位氨基酸密码子突变为琥珀密码子)与碱性磷酸酶融合蛋白的表达载体pZ_(TAG) -AP,并与pEVOL-pBpF质粒共转化E. coli BL21,利用密码子扩展修饰蛋白质技术制备光敏Z_(Bpa) -AP重组蛋白。目的蛋白经金属离子亲和层析纯化后,考察其与抗体的共价偶联效率及偶联产物的碱性磷酸酶活性。结果:SDS-PAGE结果显示含pZ_(TAG) -AP与pEVOL-pBpF质粒的E. coli BL21在加入Bpa培养后,所表达蛋白的表观分子量(56 kD)与Z_(Bpa) -AP理论值一致;经365 nm紫外激发后,约90%的抗体与Z_(Bpa) -AP共价偶联;对照实验表明Z_(Bpa) -AP与兔F(ab') 2片段未发生共价偶联;Western blot结果表明偶联产物具有碱性磷酸酶活性。结论:成功构建光敏Z_(Bpa) -AP融合蛋白,该融合蛋白能特异性共价偶联抗体Fc位点,且偶联产物具有碱性磷酸酶活性。