乌鳢水泡病毒L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
乌鳢水泡病毒L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
复制标题
DOI：
10.13300/j.cnki.hnlkxb.2021.04.021
复制
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
涂加钢
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
张艳维;张永安;涂加钢
为研究L蛋白在乌鳢水泡病毒(snakehead vesiculovirus,SHVV)增殖过程中发挥的作用,扩增mHVVL基因的前900个碱基,将其克隆到载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET32a-L,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。设置不同温度、IPTG浓度及诱导时间,选择最佳的表达条件。通过NI-NTA亲和层析柱纯化蛋白,并利用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。用Western blot鉴定抗体特异性,间接免疫荧光观察L蛋白在SHVV感染斑点叉尾鮰卵巢细胞(channel catfish ovary,CCO)中的定位情况。结果显示,纯化的L蛋白分子质量约42ku,与预期大小相符。制备的L蛋白多克隆抗体可以与L蛋白发生特异性免疫反应,且L蛋白主要定位在细胞质,表明L蛋白多克隆抗体制备成功。