Large-scale preparation and characterization of N-linked glycopeptides from bovine fetuin.
Large-scale preparation and characterization of N-linked glycopeptides from bovine fetuin.
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牛胎球蛋白 N-连接糖肽的大规模制备和表征。
DOI：
10.1016/0003-2697(90)90676-z
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发表时间：
1990
影响因子：
2.9
通讯作者：
Lee,YC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Rice,KG;Rao,NB;Lee,YC
已经开发了一种制备方案，用于从牛胎球蛋白的三个N-连接位点中的每一个中纯化去唾液酸糖肽，允许从20 g胎球蛋白中分离100 μmol量的去唾液酸糖肽。该程序产生7个无唾液酸糖肽，其被确定为在肽和寡糖结构中具有95%的同质性。分离方案使用两个高容量反相洗脱液系统。使用硼酸（用三乙胺缓冲至pH 7）进行的主要RP-HPLC纯化可同时基于糖基化位点和唾液酸化程度解析唾液酸化胰蛋白酶糖肽。进行第二次RP-HPLC纯化，用稀磷酸等度洗脱，从含脱唾液酸糖肽的短肽中分离残留肽和寡糖异质性。利用400 MHz质子NMR光谱和氨基酸和单糖分析进行产物的结构表征。糖肽含有两种先前鉴定的变体三触角寡糖，其在一个末端分支或双触角寡糖上具有与N-乙酰葡糖胺的Galβ（1 → 4）或Galβ（1 → 3）键合。这些化合物应被证明是非常宝贵的研究碳水化合物-蛋白质的相互作用，如哺乳动物肝细胞的Gal GalNAc凝集素的结合，在复杂的寡糖的详细的三维结构分析，并作为纯化的底物的糖缀合物修饰酶的作用的研究。
A preparative scheme has been developed to purify asialo-glycopeptides from each of the three N-linkage sites of bovine fetuin, allowing the isolation of 100-μmol quantities of asialo-glycopeptides from 20 g of fetuin. The procedure yields seven asialo-glycopeptides which were determined to be 95% homogenous in peptide and oligosaccharide structure. The isolation scheme uses two high-capacity reverse-phase eluant systems. The primary RP-HPLC purification performed with boric acid buffered to pH 7 with triethylamine resolved sialylated tryptic glycopeptides simultaneously on the basis of glycosylation site and degree of sialylation. A second RP-HPLC purification was performed eluting isocratically with dilute phosphoric acid which resolved residual peptide and oligosaccharide heterogeneity from asialo-glycopeptides containing short peptides. Structural characterization of the products was performed utilizing 400-MHz proton NMR spectroscopy and amino acid and monosaccharide analysis. The glycopeptides contain two previously identified variant triantennary oligosaccharides which possess either Galβ(1 → 4) or Galβ(1 → 3) linkages to N-acetylglucosamine at one terminal branch or a biantennary oligosaccharide. These compounds should prove to be invaluable in studying carbohydrate-protein interactions, such as binding by the Gal GalNAc lectin of mammalian hepatocytes, in the detailed three-dimensional structural analysis of complex oligosaccharides, and as purified substrates for the study of the action of glycoconjugate-modifying enzymes.
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