氯离子通道阻滞剂NPPB在TGF—β1诱导 HConF细胞纤维化中的作用及其机制
氯离子通道阻滞剂NPPB在TGF—β1诱导 HConF细胞纤维化中的作用及其机制
复制标题
DOI：
--
复制
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
郑雅娟
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
孙丽霞;李英俊;崔仁哲;卢迪;郑雅娟
目的.观察氯离子通道阻滞剂5一硝基一2一(3一苯丙胺)苯甲酸(NPPB)在转化生长因子p1.(TGF．131)诱导的体外培养人结膜成纤维细胞(HConF)纤维化中的作用，并进一步探索其作用机制。方法.采用细胞计数试剂盒(CCK一8)法筛选出TGF一131最适作用时间和NPPB最适作用浓度，将细胞分为对照组、TGF—.Bl处理组和TGF一13l+NPPB组，CCK一8法检测各组HConF细胞增生值(A)，采用流式细胞仪检测各组HConF细.胞周期，通过细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测各组细胞迁移情况。采用Western blot和荧光定量PCR法.检测HConF细胞向肌成纤维细胞转化的标志性蛋白d一平滑肌肌动蛋白(ol—SMA)、I型胶原蛋白(COL—I)和纤维.连接蛋白(FN)的表达，同时用Western blot法检测P13K／Akt信号通路蛋白磷酸化水平。 结果TGF一131可促.进细胞增生，并呈时间依赖性；其中TGF一131作用后48 h和72 h细胞A值比较，差异无统计学意义(P=0．064)，.选择48 h作为TGF一131作用的最适时间。NPPB抑制HConF细胞增生作用呈浓度依赖性；与对照组比较，.50¨moL／L和100 Ixmol／L NPPB组细胞增生值明显降低，差异均有统计学意义(P=0．020、0．000)，选择.100肛mol／L作为NPPB的最适作用浓度。TGF一131+NPPB组细胞A值、相对迁移面积和迁移细胞数较TGF一131.处理组下降，差异均有统计学意义(均P<0．05)；TGF一131处理组G1期细胞比例较对照组和TGF—p1+NPPB组.明显减少，s期和G2／M期细胞比例增多，差异均有统计学意义(均P<O．05)。TGF一131处理组0【一SMA、细胞外.基质COL—I和FN的蛋白及mRNA相对表达量均明显高于对照组和TGF一131+NPPB组，差异均有统计学意义.(均P<O．05)；TGF一131处理组p-P13K／P13K和p-Akt／Akt比值明显高于对照组和TGF一131+NPPB组，差异均有.统计学意义(均P<O．05)。结论NPPB可能通过抑制P13K和Akt磷酸化来抑制TGF一131诱导的HConF增.生、迁移、分化及细胞外基质合成等纤维化过程。.