沙门菌PhoN蛋白单克隆抗体及其免疫磁珠的制备
沙门菌PhoN蛋白单克隆抗体及其免疫磁珠的制备
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DOI：
10.3969/j.issn.1008-0589.202206024
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
焦新安
中科院分区：
文献类型：
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作者：
孟闯;高杨;刘钧;徐双媛;丁睿清;康喜龙;潘志明;焦新安
为制备针对沙门菌PhoN蛋白的单克隆抗体(MAb),并以其制备沙门菌的免疫磁珠,本研究构建了重组原核表达质粒pColdI-phoN和pGEX-6P-1-phoN,利用大肠杆菌系统表达并通过亲和层析纯化了鼠伤寒沙门菌重组蛋白His-PhoN和GST-PhoN,分别作为免疫原和筛选抗原,利用B淋巴细胞杂交瘤技术,经间接ELISA方法筛选获得5株能稳定分泌PhoN蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别为8H2、11E5、4B2、8F2、3B2。采用亚类鉴定试剂盒、间接ELISA和western blot方法分别鉴定各MAb的亚型、效价及特异性结合沙门菌PhoN蛋白的能力,结果显示,5株MAb的亚型均为IgG2a,测定其效价达1 ∶4 096 000以上,均能特异性结合His-PhoN和GST-PhoN,而不与His-OmpC、His-OmpF蛋白反应,表明MAb特异性较好。选取4B2 MAb进一步分析其对不同血清型沙门菌和非沙门菌的特异性,western blot结果显示4B2 MAb仅特异性识别不同血清型沙门菌,而不与大肠杆菌、志贺杆菌、空肠弯曲菌和单核细胞增生李斯特菌反应;以全菌作为包被抗原的间接ELISA检测结果也显示4B2 MAb可特异性结合沙门菌。将4B2 MAb偶联Fe_3O_4羧基磁性纳米微球制备免疫磁珠,通过菌落计数分析其对不同血清型沙门菌和非沙门菌的捕获效率,结果显示该免疫磁珠对鼠伤寒等5种不同血清型沙门菌的捕获率达70%以上,对非沙门菌捕获率低于7%。本研究制备了可特异性识别不同血清型沙门菌的PhoN蛋白MAb及其免疫富集磁珠,为样品的快速预处理和沙门菌检测提供了重要生物材料。