Molecular forms of acetylcholinesterase in two sublines of human erythroleukemia K562 cells. Sensitivity or resistance to phosphatidylinositol-specific phospholipase C and biosynthesis.
Molecular forms of acetylcholinesterase in two sublines of human erythroleukemia K562 cells. Sensitivity or resistance to phosphatidylinositol-specific phospholipase C and biosynthesis.
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人红白血病 K562 细胞两个亚系中乙酰胆碱酯酶的分子形式。
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1990.tb15274.x
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发表时间：
1990
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Rosenberry,TL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Toutant,JP;Richards,MK;Krall,JA;Rosenberry,TL
K562细胞中的乙酰胆碱酯酶（AChE）以两种分子形式存在。主要形式为在5.3 S下沉降的两亲性二聚体（G2a），次要形式为在3.5 S下沉降的两亲性单体（G1a）。在亚系K562 - 243的Triton X-100提取物中，来自苏云金芽孢杆菌的磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C（PtdIns-PLC）将大部分G2a AChE转化为亲水性二聚体（G2h），表明G2a形式具有介导其与膜附着的疏水性肌醇磷脂。用PtdIns-PLC处理完整的K562 - 243细胞释放了大约60%的总AChE活性，并提供了外部暴露的AChE的估计值。在亚系K562 - 48的提取物或完整细胞中，未通过PtdIns-PLC从两亲性二聚体形式直接转化为亲水性二聚体形式。相反，用碱性羟胺预处理是必要的，使该亚系的两亲性G2型容易被磷脂酶消化。在这方面，K562 - 48 AChE的两亲性二聚体类似于人红细胞AChE的G2a形式，由于锚中肌醇羟基的直接棕榈酰化，其对PtdIns-PLC具有抗性[Roberts等人（1988）J. Biol. Chem. 263，18766 - 18775]。通过羟胺释放该酰基链使得酶对PtdIns-PLC敏感[Toutant等人（1989）Eur.在两种K562亚系中，唾液酸酶降低了G2a形式的AChE的迁移，但不降低G1a形式的AChE的迁移。因此，G1a形式似乎代表了新合成分子的细胞内池，这些分子位于靠近trans-Golgi装置的隔室中。唾液酸酶抗性G1a分子也对PtdIns-PLC消化具有抗性;给出了这种抗性的可能解释。
Acetylcholinesterase (AChE) in K562 cells exists in two molecular forms. The major form, an amphiphilic dimer (G2a) which sediments at 5.3 S, and the minor form, an amphiphilic monomer (G1a) which sediments at 3.5 S. Extraction in the presence of the sulfhydryl alkylating agentN‐ethylmaleimide was required to preserve the G2a form.In Triton X‐100 extracts of the subline K562‐243, phosphatidylinositol‐specific phospholipase C (PtdIns‐PLC) fromBacillus thuringiensisconverted most of the G2a AChE into a hydrophilic dimer (G2h), indicating that the G2a form possessed a hydrophobic glycoinositol phospholipid that mediated its attachment to the membrane. Treatment of intact K562‐243 cells with PtdIns‐PLC released approximately 60% of the total AChE activity and provided an estimate of the externally exposed AChE. The direct conversion from an amphiphilic to a hydrophilic dimeric form by PtdIns‐PLC was not obtained in extracts or intact cells of the subline K562‐48. Instead, pretreatment with alkaline hydroxylamine was necessary to render the amphiphilic G2form of this subline susceptible to digestion by the phospholipase. In this respect, the amphiphilic dimer of K562‐48 AChE resembles the G2a form of human erythrocyte AChE, which is resistant to PtdIns‐PLC because of the direct palmitoylation of an inositol hydroxyl group in the anchor [Roberts et al. (1988)J. Biol. Chem. 263, 18766–18775]. Release of this acyl chain by hydroxylamine renders the enzyme susceptible to PtdIns‐PLC [Toutant et al. (1989)Eur. J. Biochem. 180, 503–508].In both K562 sublines, sialidase decreased the migration of the G2a form but not of the G1a form of AChE. G1a forms thus appear to represent an intracellular pool of newly synthesized molecules residing in a compartment proximal to the trans‐Golgi apparatus. The sialidase‐resistant G1a molecules were also resistant to PtdIns‐PLC digestion; possible explanations for this resistance are presented.
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