稳定表达ABCG2细胞模型的建立及其在筛选ABCG2抑制剂中的应用
稳定表达ABCG2细胞模型的建立及其在筛选ABCG2抑制剂中的应用
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DOI：
10.16605/j.cnki.1007-7847.2021.11.0221
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发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
庞建新
中科院分区：
文献类型：
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作者：
郑凤欣;赵泽安;林雪曼;吴婷;庞建新
本研究构建了一种稳定表达ATP结合盒转运蛋白2 (ATP binding cassette subfamilyGmember 2, ABCG2)并可用于筛选ABCG2抑制剂的细胞模型。首先,利用脂质体lipo3000将表达载体pcDNA3.1(+)-ABCG2转染至HEK293细胞,经G418筛选阳性克隆株后,采用qRT-PCR与Western-blot方法进行ABCG2稳转细胞株(稳转株)的鉴定;随后,利用差速离心法提取膜囊泡,通过14C-尿酸同位素摄取实验筛选ABCG2抑制剂。结果表明, ABCG2稳转株的mRNA及蛋白质表达水平分别为野生型的1 717.5倍和2.64倍;经其提取的囊泡摄取14C-尿酸的能力为对照囊泡的3.73倍。利用上述工具细胞,研究评价了临床常用的降尿酸药物对ABCG2的抑制活性。结果显示,苯溴马隆抑制ABCG2的IC_(50)值为(3.45±1.09) μmol/L, RDEA3170抑制ABCG2的IC_(50)为(9.90±2.11) μmol/L。综上所述,本实验成功构建了ABCG2抑制剂体外筛选模型,并首次发现RDEA3170具有ABCG2抑制作用。